《表1 用于p Rp T-nuc P1-18S和p Rp T-2A-nuc P1-18S载体构建的寡核苷酸序列》

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《18S rDNA介导的桔青霉核酸酶P1表达载体的构建及表达分析》

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依据Gen Bank中核酸酶P1的氨基酸序列（Gen Bank Accession No.AAB19975），将此序列送至金斯瑞生物技术有限公司进行密码子优化，以P1，P2（表1）为引物扩增密码子优化后的nuc P1，基因的C末端加上6x His标签。使用NEBuilder Hifi DNA Assembly Master Mix（Catalog#E2621L）将其连接至载体p Rp T上，得到质粒p Rp T-nu。以P1和P3，P2和P4为引物，以密码子优化后的nuc P1为模板，扩增出两段nuc P1片段（引物P2和P3加有P2A剪切肽序列，序列见附表1）。以P1和P3为引物，通过重合PCR技术，融合2个片段得到N2A片段，使用NEBuilder Hifi DNA Assembly Master Mix（Catalog#E2621L）将融合后的片段与载体p Rp T连接，得到质粒p Rp T-2A。