《表1 引物序列：大鼠骨骼肌挫伤后TGF-β1及EⅢA-FN的表达与损伤时间推断》

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《大鼠骨骼肌挫伤后TGF-β1及EⅢA-FN的表达与损伤时间推断》

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注:RPL13为内参基因

应用PRISM7500 Real-Time PCR System（美国AB公司），以逆转录所得cDNA为模板在96孔板内进行PCR扩增。按照SYBRPremix Ex TaqTMⅡ[DRR081S，宝生物工程（大连）有限公司]试剂盒要求配制20μL反应体系:SYBRPremix Ex TaqTMⅡ10μL、上游引物0.8μL、下游引物0.8μL、ROX Reference DyeⅡ0.4μL、cDNA溶液2μL、蒸馏水6μL。所有引物均由宝生物工程（大连）有限公司设计，内参基因RPL13、TGF-β1基因（Tgfb1）和EⅢA-FN基因（Fn1）的引物序列见表1。两步法PCR扩增标准程序:95℃30 s预变性；95℃5 s，60℃34 s，40个循环；95℃15 s，60℃30 s，95℃15 s，采集荧光信号，绘制熔解曲线。为了排除潜在污染，每次上机都用蒸馏水代替cDNA作为阴性对照。阴性对照未见扩增产物。