《表2 4批次排查实验的5种组合体系》

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《Luminex RVP与qPCR的对比及Luminex平台PCR产物污染的处理》

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注:新=新试剂，旧=旧试剂（发生污染时使用的），原生物安全柜=发生污染时使用的，新实验室=未接触RVP PCR产物的实验室。

在本研究中，有一批次的结果TDAS分析后均为NO CALL，原因是阴性对照有个别分析物结果高于或接近阳性阈值，如Para 3、Para 2、Influenza B，同时此三者在待测标本中也出现大范围阳性或数值偏高。本次污染考虑是在PCR加样时遇到污染，原因包括PCR反应组份污染、耗材污染、实验环境气溶胶污染等。（1）对于耗材污染，本次污染源排查时，首先更换耗材并用纯水和70%酒精清洗移液器。（2）对于实验环境，采取了开窗通风、紫外线照射，使用70%酒精擦拭生物安全柜内壁。（3）RVP中PCR组份包括RNase-Free、RT-PCR Buffer、Primer Mix、dNTP Mix、Enzyme Mix。RVP试剂盒价格昂贵，所以需用较小的试剂消耗来排查污染源。RVP试剂盒中Primer Mix与Enzyme Mix的量最少，其他三组份都为过量，且已分装成多管（如证明已被污染，则直接将这三种组份同时换成新试剂即可）；因此重点排查前两组份，同时验证是否为实验环境污染。为此，通过正交试验依次进行了如表2和表3所示的4批次5种体系（A-E）排查实验，体系A-D均重复两次实验。批次1体系A结果显示仍有部分如7、11、15、16、21为阳性（表3 A1、A2），说明污染仍存在于体系中，提示除Primer Mix外的其他组份确定有污染。批次2体系B均阴性（表3 B1、B2），而体系C仍有部分分析物偏高（表3 C1、C2）。综合第1、2批次，提示Primer Mix未被污染。批次3体系D均阴性（表3 D1、D2），提示原生物安全柜未被污染。批次4体系E均阴性（表3中E组），提示Enzyme Mix未被污染。排查结果显示:原生物安全柜未污染；Primer Mix和Enzyme Mix未污染；而其他三组份可能被污染，如前所述，对此三组份直接更换新试剂。在随后进行的标本检测中，均未发生再次污染，也进一步验证了排查结果的准确性。