《表6 正交实验结果：美洲大蠊抗肝纤维化活性部位纯化工艺研究》

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《美洲大蠊抗肝纤维化活性部位纯化工艺研究》

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由表6和表7可知，以得率为指标时，影响因素大小的顺序为:A>B>C>D，即上样量对ML-HB的得率影响最大，其次是洗脱流速和杂质洗脱剂用量，吸附时间影响最小，优化工艺为:A2B2C1D1。体外实验结果见表8，由表可知，1、6和8号工艺提取的ML-HB在24、48、72h对HSC的IC50值分别在129.9～134.6、124.1～138.8、114.5～132.2μg/mL之间，均比其他几号工艺的IC50值大，这3个工艺中C因素均为C1，可能是杂质洗脱剂用量少，杂质洗脱不完全导致提取物活性降低；工艺3、5和9提取的ML-HB，24、48和72h其IC50值分别在115.9～123.7、102.0～118.9、91.7～96.5μg/mL之间，相对较小且无显著差异。其中，正交工艺5所得ML-HB得率最高（0.71%），其工艺为A2B2C3D1。综合单因素实验分析，A2、B2为最佳上样量和最佳洗脱流速；C2与C3相比，C2提取的ML-HB得率较高，且C2和C3提取的ML-HB活性相当，故选择C2为杂质洗脱剂用量；吸附时间太短导致吸附不完全，故选择D3作为吸附时间，因此，确定分离纯化工艺为:A2B2C2D3。