《表1 实验所用引物：1株T1样噬菌体vB＿EcoS＿IME18的分离鉴定及其受体分析》

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《1株T1样噬菌体vB＿EcoS＿IME18的分离鉴定及其受体分析》

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质粒pKDsg-tonB、pKDsg-fhuA的构建利用基于PCR扩增的循环聚合酶延伸克隆技术完成[16]。选取tonB（fhuA）基因前间区序列邻近基序（protospacer adjacent motif，PAM）前20 bp序列作为向导RNA（small guide RNA，sgRNA），重新靶向质粒pKDsg-ack[17-19]。用于PCR扩增DNA片段的两对引物为:p KDsg-ton B-F（pKDsg-fhuA-F）和gam R；pKDsg-tonB-R（pKDsgfhuA-R）和gam F（表1）。使用Q5?HotStart High-Fidelity2×Master Mix，以pKDsg-ack质粒为模板进行PCR扩增。PCR仪器设置:98℃预变性2 min；98℃变性30 s，58℃退火2 min，72℃延伸2 min，35个循环；72℃延伸2 min。使用Gel Extraction Kit进行PCR产物的凝胶纯化。通过pEASY-UniSeamLess Cloning and Assembly Kit将两段PCR产物连接。取5μL连接产物转化100μL感受态细胞Trans 5α，涂布于含Spec（50 mg/L）的LB平板上，30℃过夜培养。次日，挑取单克隆于LB液体培养基中30℃振荡培养12 h。使用Plasmid Mini Kit提取质粒pKDsg-tonB、pKDsg-fhuA。