《表1 5 株单克隆抗体的竞争抑制实验 (%)》

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《寨卡病毒感染早期快速抗原检测方法的建立》

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注:剩余结合率<20%为互为完全竞争抗体；20%～60%为互为部分竞争抗体；≥60%为互为非竞争抗体。

本实验室前期从ZIKV感染者筛选出5株抗体，其中ZKns3G2、ZKns4B8、ZKns14G5和ZKns2E11为特异性抗ZIKV NS1抗体，ZKns4F10既与ZIKV NS1抗原结合还与DENV2、4型NS1抗原结合。对以上5株抗体进行抗体竞争抑制实验，结果如表1，数值代表第二抗体受第一抗体抑制与未受第一抗体抑制的信号的比值，数值越小代表第一抗体对第二抗体抑制越强，反之，数值越大代表抑制越弱。从结果可以发现ZKns3G2与ZKns4F10、ZKns14G5、ZKns2E11因结合抗原位点不一致，使得在第一抗体与抗原结合的情况下，对第二抗体无抑制作用，反之，与自身及ZKns4B8结合抗原位点相同，使得在第一抗体与抗原结合后，对第二抗体产生强抑制作用而无法使第二抗体继续结合抗原。根据抗体的抗原结合位点5株抗体可分为2类，其中ZKns3G2、ZKns4B8抗体的抗原结合位点相似归为一类，另外3株抗体ZKns4F10、ZKns14G5、ZKns2E11的抗原结合位点相似归为另一类。同时通过随机配对，检测系列稀释的ZIKV重组NS1蛋白，有16个组合表现出较好的敏感性，根据检测重组NS1蛋白的敏感性以及与正常人血清的本底，最终选择以ZKns2E11为包被抗体，用胶体金标记的ZKns3G2为检测抗体，构建胶体金试纸。通过随机配对选择的配对抗体（ZKns2E11、ZKns3G2）为互不竞争抗体，符合胶体金抗体的选择原则。