《表3 引物设计：miRNA对虎龙斑补偿生长及非特异性免疫的影响研究》

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《miRNA对虎龙斑补偿生长及非特异性免疫的影响研究》

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cDNA按照天根生化科技有限公司的miRcute Plus miRNA qPCR Kit（SYBR Green）说明书步骤进行miRNA的荧光定量，室温下解冻2×miRcute Plus miRNA PreMix、50×ROX Reference Dye和Reverse primer，将2×miRcute Plus miRNA PreMix上下颠倒轻轻混合均匀，避免起泡，在RNasefree的离心管中配制如下混合物:2×miRcute Plus miRNA PreMix 25 uL、Forward Primer 1 u L、Reverse primer（见表3）1 uL、50×ROX Reference Dye 0.4 uL、cDNA产物1～2 uL和补加RNase Free Water至50 uL.所有操作均在冰上进行，每个样品重复3次.放置于荧光定量PCR仪上，反应程序为:在95℃预变性15 min、在94℃模板变性20 s和在60℃退火34 s，最后进行荧光信号的收集，循环数设定为45个循环.以U6为内参标准化各miRNA，使用2-ΔΔCt计算其相对表达量.