《表2 预测结果：饲料中添加刺五加超微粉对吉富罗非鱼生长、脂肪沉积以及非特异性免疫能力的影响》

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《饲料中添加刺五加超微粉对吉富罗非鱼生长、脂肪沉积以及非特异性免疫能力的影响》

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根据GenBank中罗非鱼补体3、白细胞介素-1β（interleukin-1β，IL-1β）、γ-干扰素（interferon-γ，INF-γ）和肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）的序列，设计这4个目的基因的特异性引物，由苏州金唯智生物科技有限公司合成，引物序列如表2所示。取试验鱼肝脏样品10 mg左右，使用Trizol试剂（Invitrogen）提取总RNA。将提取的肝脏总RNA按照PrimeScriptTM RT M aster M ix试剂盒（TaKaRa）说明书要求进行mRNA反转录。反转录PCR的反应溶液包括PrimeScriptTMRT M aster M ix 2.0μL和RNA样品（≤500 ng），加入RNase Free ddH2O至10μL。将反应溶液在37℃孵育15 min，并在85℃下反应5 min后终止反应，置于-20℃保存。将反转录产生的cDNA按照PrimeScriptTMRT reagent Kit Perfect Real Time（TaKaRa）要求进行实时荧光定量PCR（qRT-PCR）检测。qRT-PCR反应体系（25μL）[20]包括:SYBR Premix Ex TapⅡ（2×）12.5μL、ROX染料0.5μL、PCR正向和反向引物（10μmol/L）各1μL、c DNA模板2μL和RNase free dd H2O 8μL。qRT-PCR反应方案如下:95℃持续30 s，然后是40个循环（95°C 5 s，60°C 30 s）。