《表1 绵羊STMN1基因的引物信息》

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《绵羊STMN1基因的克隆、序列分析及其组织表达》

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参考Gen Bank中山羊（Capra hircus，XM_005676827）、牛（Bos Taurus，XM_015460539）、猪（Sus scrofa，NM_001009582）和人（Homo sapiens，NM_203401）STMN1基因序列并进行比对分析。选取同源性最高的序列，用Oligo7软件设计引物P1（表1）。将5个不同发育期绵羊背最长肌和股二头肌c DNA等比例混合作为模板，用P1引物扩增绵羊STMN1 CDS区序列。PCR反应体系（25μL）:c DNA 1μL（100 ng）、2×Easy Taq PCR Super Mix 12.5μL、P1上下游引物各0.8μL（10μmol·L-1）、dd H2O 10μL。PCR反应程序:94℃预变性5 min；94℃变性30 s，58℃退火30 s，72℃延伸60 s，共35个循环；72℃终延伸10 min。PCR产物用1%琼脂糖凝胶电泳进行检测，目的条带用Easy Pure Quick Gel Extraction Kit（Trans Gen Biotech，北京）回收纯化。纯化产物与p EASY-T1 Cloning Vector（Trans Gen Biotech，北京）连接并转化至Trans5α感受态细胞中。将阳性菌落扩大培养并提取质粒，送至上海生工生物公司测序。