《表2 两组PXR受体调控的CYP3A诱导作用结果比较》

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《三叶青多糖对人肝癌细胞凋亡诱导作用及机理研究》

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临床实验和对比两组细胞凋亡有效率、Bcl-2、Bax和Survivin蛋白表达结果及其PXR受体调控的CYP3A诱导作用结果。流式细胞仪分析细胞周期及凋亡率。具体步骤为：收集细胞[数目约（1～5）×106个/m L]，500～1 000 r/min离心5 min，弃去培养液；细胞洗涤，3 m L PBS洗涤1次；乙醇固定；离心去PBS，加入冰预冷的70%的乙醇固定，4℃，1～2 h；细胞重悬，离心弃去固定液，3 m L PBS重悬5 min；细胞过滤400目的筛网过滤1次，500～1 000 r/min离心5 min，弃去PBS；染色；用1 m L PI染液染色，4℃避光30 min；流式细胞仪检测；PI用氩离子激发荧光，激光光波波长为488 nm，发射光波波长大于630 nm，产生红色荧光分析PI荧光强度的直方图也可分析前散射光对侧散射光的散点图；结果判断。免疫化学法检测Bcl-2、Bax和Survivin蛋白。石蜡切片脱蜡至水；3%H202室温孵育5～10分钟，以消除内源性过氧化物酶的活性；蒸馏水冲洗，PBS浸泡5 min，（如需采用抗原修复，可在此步后进行）；5%～10%正常山羊血清（PBS稀释）封闭，室温孵育10 min。倾去血清，勿洗，滴加适当比例稀释的一抗或一抗工作液，37℃孵育1～2 h或4℃过夜；PBS冲洗，5 min×3次；滴加适当比例稀释的生物素标记二抗（1%BSA-PBS稀释），37℃孵育10～30 min；或滴加第二代生物素标记二抗工作液，37℃或室温孵育10～30 min；PBS冲洗，5 min×3次；滴加适当比例稀释的辣根酶标记链霉卵白素（PBS稀释），37℃孵育10～30 min；或第二代辣根酶标记链霉卵白素工作液，37℃或室温孵育10～30 min；PBS冲洗，5 min×3次；显色剂显色（DAB或AEC）；自来水充分冲洗，复染，封片。考察THP对Bcl-2表达/癌细胞凋亡的影响和Survivin表达/癌细胞凋亡的影响；考察THP对PXR受体调控的CYP3A诱导作用，可半定量地评价THP对肝脏降解致癌物及其他效应物功能的诱导作用。