《表2 PCR产物:大腹园蛛梨状腺丝重组蛋白的表达纯化与纺丝》
以A.ventricosus PySp1重复单元DNA序列为模板,设计2对特异性引物(表1)。DNA片段经Bsa I与Esp3 I酶切后产生的粘性末端可互补配对且不含有内切酶的识别序列,可以实现无缝连接。5′GCT3′为PySp1重复单元的第一个氨基酸Ala的密码子;5′GTA3′为PySp1重复单元的最后一个氨基酸Val的密码子。在PySp1重复单元序列的5′与3′分别引入Val密码子、Ala密码子,以实现多重复单元的无缝连接(表1),两种密码子均简记为3 bp。PCR产物编号及对应的引物如表2所示。PCR体系为50μL:Q5 DNA polymerase 0.5μL;正反向引物各2.5μL;模板0.5μL;5×Q5 Reaction Buffer 10μL;2.5 mmol/L dNTPs 4μL,用ddH2O补齐至50μL。反应条件:98℃,30 s预变性,98℃,10 s变性;60℃,30 s退火;72℃,30 s延伸;72℃,120 s补平,4℃保存。最后对PCR产物进行1%琼脂糖凝胶电泳检测。
图表编号 | XD00221350000 严禁用于非法目的 |
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绘制时间 | 2020.10.22 |
作者 | 易拓、朱红年、孟清 |
绘制单位 | 东华大学化学化工与生物工程学院、东华大学化学化工与生物工程学院、东华大学化学化工与生物工程学院 |
更多格式 | 高清、无水印(增值服务) |