《表2 ISSRPCR正交试验L16(45)》

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《黑老虎ISSR-PCR反应体系的建立与优化》

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采用正交设计试验确定每个因素中扩增效果最好的条件。正交试验主要包括设计Mg2+、引物、Taq DNA聚合酶、DNA、dNTPs这5个试验因素的梯度差。每一个因素都设计4个浓度梯度差，如表1、表2所示。为避免偶然性发生，每个浓度设置3个重复。除此之外，这4个浓度梯度系列中，每个体系都加入2.5μL 10×PCR Buffer，最后用灭菌后的ddH2O补足至20μL。本次选用的引物为866（序列为5′-CTC CTC CTC CTC CTC CTC-3′）。退火温度为54℃。