《表1 分组方案：屎肠球菌活菌和热灭活菌对RAW264.7细胞肿瘤坏死因子-α/白细胞介素-10平衡以及丝裂原活化蛋白激酶信号通路的影响》

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《屎肠球菌活菌和热灭活菌对RAW264.7细胞肿瘤坏死因子-α/白细胞介素-10平衡以及丝裂原活化蛋白激酶信号通路的影响》

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采用CCK-8法检测不同剂量的屎肠球菌活菌或热灭活菌对RAW264.7细胞活力的影响，确定后续试验的适宜细菌与细胞比率。将RAW264.7细胞培养至汇合达80%～90%时进行传代铺板。用DMEM细胞完全培养液调整细胞密度为5×105个/mL，在6孔板中每孔加细胞悬液和DMEM细胞完全培养液各1 mL，放入37℃、5%CO2培养箱中孵育24 h，去上清，用PBS洗涤2次，然后根据3因素2水平设计试验方案。因素1和水平：屎肠球菌类型，活菌或灭活菌；因素2和水平：剂量，106或108CFU/mL；因素3和水平：作用时间，3或6 h。在3和6 h作用时间下分别设置阴性对照（DMEM细胞基础培养液，即不含血清、不含抗生素）和阳性对照（LPS，2μg/mL）。试验共设12个组（表1），每个组各设6个重复。各组的细胞都在37℃、5%CO2培养箱中孵育。试验结束后，将细胞培养板放置于冰上，马上收集各个组的细胞培养上清，并将上清于4℃、6 000 r/min离心10 min去除颗粒物质，然后-40℃保存，待检测细胞因子含量。