《表2 crDNA转录体系》

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《PCR扩增技术联合CRISPR-Cas13a系统对MTB DNA检测方法的初步研究》

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注1μg为crDNA用量，X为根据每次提取的crDNA浓度来计算体系中所需加入的crDNA模板体积。NTP Buffer Mix为NTP缓冲混合液；T7RNA Polymerase Mix为T7RNA聚合酶混合液；nuclease-free water为无核酸酶水，其用量为加nuclease-free water到30μl，确保总体系为30μl

3.crRNA探针的转录及分离：将扩增后的含crDNA的扩增体系充分混匀后，37℃转录过夜（转录体系见表2），转录为实验所需的3条不同的crRNA，即IS6110-1crRNA、IS6110-2crRNA、IS6110-3crRNA，每条crRNA设置3个复孔，对构建成功的含有MTB DNA的质粒进行检测，对3个复孔的检测结果取均值（3个复孔每一次循环检测的相对荧光强度数值结果相加除以3得到每一循环的结果，共60个循环），比较3条不同crRNA信号的强弱，选择相对荧光强度值最高的1条crRNA用于后续实验检测。具体序列见表3。