《表1 工程重难点分析:艾地苯醌改善全脑缺血大鼠认知功能及其对海马神经元蛋白表达的影响》

《表1 工程重难点分析:艾地苯醌改善全脑缺血大鼠认知功能及其对海马神经元蛋白表达的影响》   提示:宽带有限、当前游客访问压缩模式
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《艾地苯醌改善全脑缺血大鼠认知功能及其对海马神经元蛋白表达的影响》


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组织RNA提取:由-80℃超低温冰箱中取出大鼠脑组织,迅速磨成粉末状;取100 mg新鲜研磨的粉末加入含有1 m L Trizol裂解液的EP管中,混合均匀;室温静止5 min,加入200μL氯仿,然后充分混匀,室温放置10 min;4℃离心分取上层水相,将离心好的上层水相放置到RNase-free 1.5 ml离心管内,后加入等量的异丙醇进行充分震荡,然后在冰上放置大约30 min;取出离心管,4℃离心分取得到RNA沉淀;应用500μl的75%酒精对RNA沉淀洗涤2次,风干,加入50μl RNase-free水在室温下对RNA溶解;应用Nano Drop对提取的RNA浓度检测,置于-20℃备用。对抽取的RNA进行体外反转录实验最终得到产物c DNA,进行此操作时要严格按照说明书进行;在16℃的条件下对其孵育30 min,42℃孵育30 min,后在85℃条件下对其加热5 min,后放置在4℃条件下对其保存。将c DNA作为模板进行荧光定量PCR检测,反应体系为Taq Man?Universal PCR Master Mix20μL,操作仪器为罗氏Light Cycler480,内参照为β-actin表达水平,?CT为BDNF m RNA相对值,?CT=CTβ-Actin-CTBDNF,引物信息见表1。采用同样的方法,检测Trk B m RNA相对值。