《表1 TRAIL基因引物合计》

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《TRAIL基因多态性在糖尿病合并特发性血小板减少性紫癜患者中的表达及临床治疗指导价值》

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（1）标本采集。观察组、对照1组入院后次日取外周静脉血（空腹）3 ml，EDTA抗凝，采用离心柱法提取各组外周血基因组DNA，各取DNA1μl琼脂糖凝胶电泳完成DNA的验证。（2）TRAIL基因测定。采用PCR-RFLP法分析测定各组TRAIL基因、基因位点，计算基因型和等位基因频率，引物设计见表1。根据本实验要求完成PCR参数设置：30℃下10 min；42℃下30 min；99℃下5 min；5℃下5 min，连续进行35个循环，72℃下10 min延长，获得最终产物并放入1.5%琼脂凝胶电泳，β-actin为内对照。扩增产物采用浓度为2%琼脂糖凝胶电泳进行验证[7]。（3）限制性内切酶酶切PCR产物。分别采用两种酶酶切，给予PCR产物用Rsa酶酶切反应，反应体系：PCR产物10μl，DD Water 16μl，10×Buffer B 2μl，Rsa I酶1μl，在37℃下完成2 h水浴；另外取PCR产物，采用Tas I酶酶切反应，设定反应体系：PCR产物10μl，DD Water 16μl，10×Buffer B2μl，在65℃下完成3 h水浴，酶切产物采用浓度为2.5%琼脂糖凝胶电泳进行验证[8]。