《表3 福寿螺内生纤维素酶的重组表达》

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《入侵动物福寿螺内生纤维素酶特性及应用研究进展》

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采用基因工程技术可以实现福寿螺内生纤维素酶的纯化和大规模生产。目前，福寿螺纤维素酶基因在酵母、大肠杆菌、真菌、哺乳动物细胞、杆状病毒等宿主中进行了表达，活性得到较大提高（表3）。研究发现，在毕赤酵母（Pichia pastoris）中重组表达福寿螺纤维素酶EG65a对底物羧甲基纤维素钠（CMC-Na）的水解活性最高，其次是EG65b，而EG65c水解活性最低（Yin et al.，2011）。纤维素酶EG27、EG27I与EG27II采用毕赤酵母表达后，EG27的活性约是EG27I与EG27II的2倍，重组EG27I与EG27II两者的比活力差异较小（郭睿，2007）。福寿螺纤维素酶基因mfc在以橘皮为基质在酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）表达时，其内切-1，4-β-葡聚糖酶、外切-1，4-β-葡聚糖酶活性为337.42和1.36U·m L-1，比野生型高23倍和17倍，而在以麦麸为碳源进行重组表达时，内切-1，4-β-葡聚糖酶、外切-1，4-β-葡聚糖酶活性达到野生型的63倍和24倍（Yang et al.，2016a，2018a）。纤维素酶EGX在大肠杆菌（Escherichia coli）中重组表达后，水解微晶纤维素、CMC-Na及木聚糖的活性分别为600.91、24.78及175.43 U·mg-1，EGX重组表达菌株水解微晶纤维素的比活力达到野生EGX的16倍（黄妙容等，2011）。使用异源启动子在灰盖鬼伞菌（Coprinus cinereus）表达内生纤维素酶基因mfc，内切型葡聚糖酶的表达活性提升为原来的34倍（Cheng et al.，2009）。对纤维素酶EGX的基因采用各种宿主进行重组表达后的活性为大肠杆菌>哺乳动物细胞>酿酒酵母细胞（谷嵩，2007；黄妙容等，2011）。