《表1 毒力基因扩增引物序列》

  提示：宽带有限、当前游客访问压缩模式

本系列图表出处文件名：随高清版一同展现

《某县医院肠球菌临床分离株耐药性及毒力基因携带情况分析》

1. 获取 高清版本忘记账户？点击这里登录

1. 下载图表忘记账户？点击这里登录

采用细菌基因组DNA提取试剂盒[天根生化科技（北京）有限公司]提取52株VRE[（耐万古霉素屎肠球菌（vancomycinresistant Enterococcus faecium，VREfm)47株、耐万古霉素粪肠球菌（vancomycin-resistant Enterococcus faecalis，VREfs)5株）]和31株随机选取的万古霉素敏感屎肠球菌（vancomycin sensitive Enterococcus faecium，VSEfm）基因组DNA，采用Nano Drop 1000紫外分光光度仪（美国赛默飞世尔公司）测定其浓度和纯度。依据文献[4]设计引物（表1），委托生工生物（工程）上海有限公司合成。采用C1000 TMThermal Cycle PCR扩增仪（美国伯乐公司）检测上述菌株基因组DNA中ace、asa1、cyl A、efa A、esp、gel E、acm、cpd和hyl毒力基因。反应体系为25μL，包括10μL Premix Taq混合液[含d NTP、DNA聚合酶链反应（polymerase chain reaction，P C R）缓冲液]（长沙芯科生物科技有限公司）、10μmol/L上游和下游引物、100 ng DNA模板。扩增条件：94℃5 min；94℃40 s，56℃30 s，72℃1 min，35个循环；72℃5 min。采用溴化乙锭预染色的1.5%琼脂糖凝胶电泳检测各目的基因扩增片段后，委托生工生物工程（上海）有限公司测序，采用Blast软件进行序列比对[5]。