《表2 变量及其定义：肝素C5异构酶的表达优化及分子改造》

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《肝素C5异构酶的表达优化及分子改造》

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将密码子优化后的斑马鱼来源的基因Glce（NP＿998014.1）经PCR扩增（所用引物见表2）后酶切连接至pColdⅢ、pET20b、pET28a，构建重组载体pColdⅢ-C5、pET20b-C5、pET28a-C5。将来源于大肠杆菌的麦芽糖蛋白（Maltose binding protein，MBP）、酿酒酵母的促溶标签SET2（Solubility-enhancement tags）及小泛素样蛋白（Small ubiquitin-related modifier，SUMO）基因经PCR扩增（所用引物见表2）后一步克隆连接至pColdⅢ-C5构建重组载体pColdⅢ-MBP-C5、pColdⅢ-SET2-C5、pColdⅢ-SUMO-C5。42℃热激90 s后，转化至E.coli JM109感受态细胞中，挑取转化子测序，测序正确则上述重组载体构建成功。按上述方法将测序成功的重组质粒转化至E.coli BL21（DE3）感受态细胞。