《表1 Real-time PCR引物序列》

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《L929细胞条件培养基诱导培养的小鼠原代巨噬细胞生物学特性对比》

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原代细胞培养7 d后，采用LPS（100 ng/mL）+IFN-γ（20 ng/mL）作为巨噬细胞M1型诱导剂，采用IL-4（20 ng/mL）作为巨噬细胞M2型诱导剂，分别刺激两种来源巨噬细胞24 h，刺激结束后毎孔加入1 mL Trizol提取总RNA，统一RNA浓度后逆转录合成cDNA，逆转录体系为DEPC水（10.125μL）、5×Buffer（5μL）、dNTPs（1.25μL）、RNA酶抑制剂（0.625μL）和M-MLV逆转录酶（1μL），反应结束后，取出cDNA样品，加入75μL DEPC水，吹打混匀后备用。实时荧光定量PCR（qPCR）反应体系为2μL模板cDNA、7μL DEPC水、10μL SBYR Green Master Mix、0.5μL上游引物、0.5μL下游引物，引物序列见表1。反应程序：95℃5 min；95℃15 s，60℃1 min，循环40次。以GAPDH为内参基因，采用2-ΔΔCt法计算mRNA相对表达水平。