《表3 L16(45）正交设计SSR-PCR体系16个处理的得分》

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《木麻黄SSR-PCR反应体系的建立与优化》

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按表2正交试验设计的要求进行扩增，PCR产物电泳结果如图2。结果表明，16个处理因各因素水平的不同，扩增结果存在明显差异。除处理13未扩增出产物外，其他处理均能扩增出产物，且无明显杂带产生。其中处理1、7、12、14条带亮度最弱，处理3、4、5、6、9、10、15的条带亮度、清晰度明显优于其他处理，尤以处理6和处理15条带在3次重复中最为清晰明亮。根据何正文的直观分析法，3个重复的16个处理各自得分如表3所示。其中处理15平均分最高，得到了16分，其次为处理6，因此可通过直观分析法暂时选定木麻黄SSR-PCR反应的最优处理为15号组合，即：10μL反应体系中含有：1×PCR buffer、2ng模板DNA、0.5μmol·L-1引物、1.75 mmol·L-1Mg2+、0.2 mmol·L-1d NTP、1.25 U Taq酶。利用正交设计助手3.1对三次评分结果进行极差分析，计算每个因素相同水平下的平均值k，以及相同因素不同水平间的极差R（见表4）。均值k可反映出不同因素不同水平的扩增效果，k值越大，扩增效果越好；R值反映了各因素各水平对木麻黄SSR-PCR反应体系的影响程度，R值越大，对体系的影响程度越大。根据表4可知，各因素对木麻黄SSR-PCR体系的影响程度由大到小为：引物>Mg2+>d NTP>Taq酶。