《表2 ISSR分析的引物》

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《不同产地温莪术遗传多样性及亲缘关系的ISSR分析》

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反应体系25μL，包括DNA模板1μL，2×Eco Taq PCR Super Mix 12.5μL，引物1μL，dd H2O 10.5μL。采用PCR仪进行退火温度梯度试验，逐一确定所筛选引物的最佳退火温度。设定退火温度梯度范围50-62℃，自动形成8个梯度。PCR扩增程序为94℃预变性5 min；94℃变性30 s，50-62℃复性30 s，72℃延伸1.5 min，35个循环；72℃延伸10 min；反应结束后4℃保存。扩增产物用1.5%琼脂糖凝胶进行电泳，凝胶成像系统检测拍照，根据多态性条带多少及清晰度确定每条引物的最佳退火温度（图1、表2）。