《表1 影响因子权重表：颅脑损伤患儿血清中miR-34a和NO TNF-α表达及意义》

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《颅脑损伤患儿血清中miR-34a和NO TNF-α表达及意义》

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使用miRcute miRNA提取分离试剂盒提取血清RNA，检测其浓度与纯度。使用miRcute miRNA c DNA第一链合成试剂盒进行逆转录反应得到c DNA，反应体系为20μL（0.5g/m L总RNA 1μL，反转录酶2μL，RNase Free水5μL，2×反转录缓冲混合物10μL，0.1%BSA 2μL），反应条件为:37℃，60min；85℃，5min；4℃，5min。采用Talent荧光定量检测试剂盒和7500Fat型实时荧光定量PCR仪对两组研究对象血清中miR-155水平进行定量检测，反应体系为20μL（c DNA模板2μL，2×miRcute miRNA Premix 10μL，正向引物0.4μL，正向引物0.4μL，dd H2O 7.2μL），引物交由上海生工生物工程有限公司合成，引物序列详见表1，反应条件为:94℃2min；95℃20s，60℃34s，45个循环。溶解曲线分析为95℃15s，60℃1min，95℃15s （收集荧光信号），60℃15min。使用U6为内参基因，相对表达水平RQ=2-△△Ct（△Ct=Ct目标-Ct内参，△△Ct=△Ct实验组-△Ct对照组）。