《表1 两种探针吸附不同物种Ig G的解离常数》

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《一种用于抗体快速分离的嗜硫纳米粒子的制备及表征》

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本研究合成的聚乙二醇化磁性纳米粒子可特异性结合抗体蛋白，推测是基于砜基的嗜硫作用和聚乙二醇链的抗非特异性吸附功能。其中，嗜硫作用是通过砜基与抗体结构中双硫键的相互作用实现的，因此，不同物种IgG结构的差异可能造成该磁性纳米粒子与抗体蛋白亲和强度的不同。采用BLI传感器测定了人、牛、羊和兔4个物种的IgG在“砜基-聚乙二醇”表面的吸附情况，用以考察此结构的物种选择性，并与Protein A进行比较。BLI传感器是一种基于生物膜干涉技术的实时、无标记生物传感器，生物分子在传感器表面的吸附会引起传感器表面干涉光谱的漂移，漂移程度与传感器表面生物分子的有效吸附量相关，以此实现对生物分子吸附/解离现象的监测[23]。BLI传感器检测的是生物分子动态吸附过程，与静态吸附实验条件不同，结果也会略有不同。图8A为人IgG和BSA在传感器表面的吸附/解离过程，结果表明，“砜基-聚乙二醇”结构对人IgG具有良好的选择性吸附。通过检测不同浓度IgG的吸附/解离过程，得到了IgG在“砜基-聚乙二醇”结构与Protein A传感器探头表面的等温吸附曲线（图8B），计算得到不同物种IgG在两种结构表面的解离平衡常数（表1）。“砜基-聚乙二醇”结构结合IgG具有一定的物种选择性，其与IgG的结合强度为羊>牛>兔>人，这可能是由于不同物种IgG分子中二硫键的数量和位置的不同造成的。需要指出的是，Protein A配基是与抗体的Fc恒定区片段结合，与砜基嗜硫作用的结合的部位有所不同，这可能是两者吸附抗体的物种选择性不同的原因。上述结果表明，“砜基-聚乙二醇”结构结合IgG具有一定的物种选择性，且区别于目前广泛使用的Protein A配基。