《表1 总RNA的定量和质控结果》

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《地中海贫血患者血浆环状RNA的筛查及结果分析》

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通过Nano Drop ND-1000测定样品总RNA样品的纯度和浓度，RNA质控结果见表1。提取实验组、对照组血浆总RNA，利用基因芯片AS-S-CR-H-V2.0进行标记基因序列杂交。首先，用Rnase R （E picentre，Inc.）消化酶解样品总RNA，去除线性RNA，富集circ RNARNA。第二，利用随机引物法扩增样品circ RNA转录c RNA，并进行荧光标记；RNeasy Mini Kit （Qiagen）对标记的c RNAs进行纯化处理；利用Nano Drop ND-1000测量成功标记的c RNA （pmol Cy3/μg c RNA）的浓度比活性。第三，在5μL 10×阻断剂和1μL 25×裂解缓冲液中添加1μg标记c RNA以进行片段处理，60℃孵育30 min，后加入25μL 2×杂交缓冲进行稀释。第四，吸取50μL杂交溶液滴加在circ RNA基因芯片载玻片，65℃孵育17 h。最后，对circ RNA基因芯片进行清洗、固定、扫描，提取芯片数据，进行数据分析，寻找实验组与对照组间差异表达的circ RNA，通过Fold Change进行筛选circ RNA，验证差异倍数较大circ RNA。