《表1 基准回归结果:汉滩病毒感染EA.hy926细胞上调固有免疫相关分子表达的研究》

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《汉滩病毒感染EA.hy926细胞上调固有免疫相关分子表达的研究》


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当感染不同时间(0 h、6 h、12 h、24 h、48 h、72 h)后收集每孔细胞,共6管,利用Trizol法提取不同感染时间段的细胞RNA。将每管中加入200μl氯仿;离心后取上清,加入等量的异丙醇过夜沉淀;离心后用75%的无水乙醇清洗沉淀;将沉淀晾干,每管中加入20μl DEPC水溶解RNA;最后进行RNA浓度测量。使用反转录试剂盒和2×SYBR染料进行RT-q PCR检测细胞中相关基因的m RNA表达水平。检测基因包括:模式识别受体[Toll样受体(Toll-like receptor,TLR)1、TLR2、TLR3、TLR4、RIG-I、MDA5];细胞因子(IL-1β、IL-6、IL-8、IL-10、CCL5、IFN-β);抗病毒相关分子(IFITM1、IFITM2、IFITM3、ISG15、OAS1、Mx A),基因的引物由上海生工生物工程技术服务有限公司合成,其序列如表1所示,其中GAPDH为内参。