《表1 定量引物序列：低剂量微囊藻毒素MC-LR诱导罗氏沼虾肝胰腺损伤及凋亡》

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《低剂量微囊藻毒素MC-LR诱导罗氏沼虾肝胰腺损伤及凋亡》

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使用Trizol一步法提取肝胰腺组织的总RNA，通过琼脂糖凝胶电泳28s r RNA和18s r RNA比值检测RNA完整性。用微量分光光度计（Thermo NanoDrop 2000c，美国）测定分离RNA的浓度和纯度，总RNA使用带基因组DNA去除的反转录试剂盒（Takara，日本）反转成c DNA。通过实时荧光定量PCR（q PCR）检测促凋亡基因（bax）、抗凋亡基因（bcl2）、细胞色素C基因（cytc）以及半胱氨酸蛋白酶3基因（casp3）的m RNA的表达。选择18s r RNA（18s）和β-机动蛋白（actb）作为内参基因，所使用的引物序列如表1所示，引物的扩增效率（E）值都在90%～110%之间。基因的相对表达量采用2-△△Cq法进行（F=2-△△Cq，△△Cq=(Cqtarget gene-Cqmean of actb and 18s）enrofloxacin-（Cqtarget gene-Cqmean of actb and 18s）control)计算MC-LR暴露下基因表达的相对变化。