《表1 清道夫受体CD36引物及探针信息》
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《清道夫受体CD36基因缺陷对正常高值血压患者动态血压节律及代谢指标的影响研究》
另抽取清晨空腹外周血5 ml,并分装、编号。利用全血基因组DNA试剂盒(北京原平皓生物技术有限公司)提取患者基因组DNA,具体操作参照试剂盒说明书。将提取的外周血进行序列特异引物引导的聚合酶链式反应(PCR-SSP)检测,以鉴定清道夫受体CD36基因缺陷。引物及探针设计按照亚洲人常见的缺陷类型及部位进行(见表1)[7]。在加样时先将CD36-primers和CD36-buffer从-20℃冰箱中取出。CD36-buffer融化后在旋涡混匀器上彻底涡旋混匀待用。基因片段的扩增分为两步,首先建立反应体系(20μl):SinoBio 2×Master Mix10μl、上游引物1μl(0.8μmol/L)、下游引物1μl(0.8μmol/L)、模板1μl(10~20 ng);双蒸水(ddH2O)7μl,然后进行扩增,扩增条件为:94℃3 min(预变性);94℃30 s,65℃30 s,72℃60 s,共35个循环;72℃5 min,4℃条件下保温。将以上所得PCR产物10μl放入预先准备好的1.5%琼脂糖凝胶中电泳(120 mV电压,30 min),电泳结束后,放琼脂凝胶于凝胶成像系统观察,用凝胶成像仪扫描成像并保存结果。
图表编号 | XD00168524000 严禁用于非法目的 |
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绘制时间 | 2020.08.15 |
作者 | 张爱军、郭宏伟、冯琼、杨放 |
绘制单位 | 湖北省武汉市武昌医院心内科、湖北省武汉市武昌医院心内科、湖北省武汉市武昌医院心内科、湖北省武汉市武昌医院心内科 |
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