《表2 引物TcF1R2正交实验方案》

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《红豆杉TcERF基因qRT-PCR体系构建与优化》


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A、B、C代表3种影响因素;1~9为3因素3水平代表的9种组合;Ki:水平效应,即任一列上水平号为i所对应的实验结果之和;ki:平均效应,即水平和除以水平数;R:极差,即在任一列上最大K(k)值与最小K(k)值之差。cDNA模板浓度为0.6μg总RNA反转录合成的cDNA原液稀释5倍;引物浓度

将引物TBC41和TcF1R2按照正交实验方案同时进行qRT-PCR,并设置阴性对照。本研究中可以看出TcF1R2引物组合扩增效率最高的方案为A1B3C3(表2)。分析3个因素影响力大小,依次为PCR反应体系>引物量>模板用量。此外,在常用的10和20μL体系下,引物TcF1R2最佳的组合方案分别为A2B2C3与A3B1C3。