《表4 PCR反应体系：2018年黑龙江省大庆地区犬冠状病毒M基因分子流行病学调查》

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《2018年黑龙江省大庆地区犬冠状病毒M基因分子流行病学调查》

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取出RT-PCR反应所需试剂，放置于室温待其自然融化（20μL RT-PCR反应体系见表4）。将表中各组份按照反应体系依次加入PCR管中混匀，离心后放入PCR仪。以合成的c DNA为模板，进行M基因PCR扩增，片段大小约为409 bp。PCR扩增条件：95℃预变性5 min；94℃变性30 s；55℃退火1 min，72℃延伸30 s，32个循环；72℃再延伸5 min，取4μL PCR扩增产物进行1%琼脂糖凝胶电泳检测，在110 V、120 mA的电压和电流下进行电泳30 min。小心取出琼脂糖凝胶将其放置于凝胶成像分析系统中观察是否有目的条带，照相标记保存图片。