《表1 变量测量及来源：2018-2019年四川省伪狂犬病毒的流行病学调查及gC、gE、TK基因遗传进化分析》

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《2018-2019年四川省伪狂犬病毒的流行病学调查及gC、gE、TK基因遗传进化分析》

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对384头患病猪只的小脑、肺脏、胎衣等组织研磨，液氮反复冻融3次后12 000 r/min离心5 min收集上清；公猪精液首先通过破乳去除过多的蛋白然后12 000 r/min离心5 min收集上清。根据传统的酚-氯仿法抽提组织中的DNA，参照国家PRV-gE基因的检测引物gE1-F/R（表1)对抽提的DNA样品进行PCR扩增。PCR反应体系（10μL）:2×GC buffer 5μL，ddH2O 2μL，正、反向引物（100μmol/L）各0.5μL，d NTPs （2.5 mmol/L）1μL，Taqhas DNA聚合酶(5 U/μL） 0.1μL，DNA模板0.9μL。PCR反应条件：95°C min；95°C 30 s，60°C 30 s，72°C 30 s，30个循环；72°C 7 min。同时按照Trizol法抽提组织中的RNA，用PrimeScriptTM RT Reagent Kit合成cDNA。同时利用PCR和RT-PCR技术对常见的猪瘟病毒（classical swine fever virus，CSFV）、猪繁殖与呼吸障碍病毒（porcine reproductive and respiratory syndrome virus，PRRSV）、猪细小病毒（porcine parvovirus，PPV）、猪圆环病毒2型（porcine circovirus 2，PCV2）、猪圆环病毒3型（porcine circovirus 3，PCV3）病原进行检测，引物见表1。PCR反应结束后，取5μL产物进行1%的琼脂糖凝胶电泳，最终若PRV-g E的产物条带约534 bp，则证明是PRV阳性感染猪只。