《表2 KASP标记KALS1R19681913B在小群体中的分型结果与抗性表型》

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《油菜抗咪唑啉酮类除草剂基因标记的开发与应用》

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油菜突变体M9中的抗性基因BnALS1R与常规油菜的BnALS1在第1913处存在SNP位点（G/A），属于错义突变位点（丝氨酸/天冬酰胺），携带A等位变异为含抗除草剂基因BnALS1R的抗性材料，携带G等位变异的为不含抗除草剂基因BnALS1R的敏感材料[18]。由于油菜ALS基因家族核酸序列的高度同源性，特别是BnALS1和BnALS3（GenBank登录号为Z11524、Z11526）在核酸水平的同源性达98%[23-24]，因此本研究选择在第1913突变位点上下游2个基因序列有差异的位置设计2组特异性KASP标记引物KBA1R19681913A和KBA1R19681913B（表1）。选取含有抗性基因的M9后代株系M9-2、M9-14和不含抗性基因的MICMS双低恢复系3075R和N341，以及它们杂交获得的F1代和F2群体单株共18个油菜材料，利用设计的KASP标记进行多态型筛选与小群体验证。多次验证结果发现，标记KBA1R19681913A在亲本和小群体中没有多态性，而标记KA1R19681913B具有多态性，其中KBA1R19681913B-X-allele检测携带敏感基因的等位变异，KBA1R19681913B-Y-allele检测携带抗性基因的等位变异，上游共同引物KBA1R19681913B-common与BnALS3存在3处碱基差异（图1）。从图2可以看出，该标记可以清晰地把3种基因型分开，其中靠近Y轴的红点为携带A等位变异的抗IMI类除草剂基因BnALS1R纯合型材料，如M9后代株系M9-2、M9-14等；靠近X轴的蓝点为携带G等位变异的不含抗IMI类除草剂基因BnALS1R纯合型材料，如MICMS双低恢复系3075R和N341等；中间的绿点为携带G/A等位变异的含抗IMI类除草剂基因BnALS1R杂合型材料，如F1代和F2群体单株M318-5、M318-7和M318-9等，黑点为空白对照（图2和表2）。