《表1 文心兰25条pre-miRNAs qPCR引物》

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《文心兰25条miRNA前体序列特性及其表达分析》

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为了进一步了解文心兰pre-miRNAs在植株中的潜在功能，首先采用Trizol UP RNA提取试剂盒（全式金生物技术有限公司），提取样品不同组织部位和软腐病侵染下假鳞茎的总RNA。用超微量分光光度计（Thermo Electron Corp.，USA）检测RNA样品浓度，并用1%琼脂糖凝胶电泳检测其完整性。用Prime Script TM RT Reagent逆转录试剂盒（TaKaRa），将已经提取的各个组织部位总RNA反转录为cDNA。其次，利用DNAMAN ver.6.0对25条文心兰前体序列进行引物设计（表1）。引物均由尚亚生物公司合成。参考TaKaRa SYBR Premix Ex TaqTM试剂盒说明书的方法，使用罗氏LightCycler480实时荧光定量PCR仪，检测25条pre-miRNAs在文心兰不同组织部位及软腐病侵染下假鳞茎中的表达情况。选用miR168-unigene0047942为内参基因，根据2-ΔΔCt公式计算25条pre-miRNAs在文心兰不同组织部位和软腐病侵染下假鳞茎中的相对表达量，3次生物学重复。