《表2.E.coli tRNASec多点突变》

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《大肠杆菌tRNA~(Sec)关键核苷酸位点》

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为了确定tRNASec不同位点的突变对酶活的影响，我们进行t RNASec突变体的构建，突变位点详见表2。首先，在selC基因的“G18、U20、A21”和“U63、G64、U65”位点处，分别使用简并引物引入碱基突变，得到了16个多点突变体。然后对大肠杆菌tRNASec的G18和G19位点进行其他3个碱基的单点突变，共产生G18A、G18U、G18C、G19A、G19U和G19C这6个单点突变体。最后，我们构建了22个p CDF-Sel C’和p SUABC'重组质粒。