《表1 新疆野苹果MsNACs定量引物》

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《新疆野苹果NAC基因分析及抗腐烂病基因筛选》

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根据腐烂病病原菌侵染后新疆野苹果转录组数据，利用Rstudio绘制腐烂病侵染后MsNACs的表达模式热图。用柱式植物总RNA抽提纯化试剂盒（Sangon Biotech，B518631，中国）提取腐烂病侵染后树皮的总RNA，用PrimeScript RT reagent Kit with gDNA Eraser（TAKARA，RR047A，日本）反转录合成cDNA，随后用TB Green Premix Ex Taq(TaKaRa，RR420A，日本）进行qRT-PCR验证，内参基因为MsEF1-α，引物序列如表1所示。qRT-PCR反应体系为稀释20倍的cDNA模板1.6μL，上下游引物各0.8μL、2×TB Green Premix Ex TaqⅡ（Tli RNaseH Plus）10μL、ddH2O 6.8μL。采用两步法PCR，反应程序为95℃预热30 s，95℃变性5 s、58～61℃30 s，共40个循环，95℃10 s，65℃5 s，60℃读取荧光值。定量仪器为CFX96实时荧光定量PCR仪（BIO-RAD，美国），每种样品进行3次生物学重复，3次技术重复。采用2–ΔΔCt法分析试验数据，使用Excle 2010软件制图。