《表4 引物L16(4)3正交试验设计》

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《内蒙古地区典型春小麦亲缘关系的SRAP分析》

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以‘龙麦36号’、‘定西40号’、‘农麦2号’、‘巴优1号’等4个小麦品种为模板，进行反应体系的优化，筛选出了21对多态性引物。本试验在20μLPCR反应体系中，针对DNA模板量、正反向引物量、2×Taq Master Mix（0.1 U/μL Taq DNA聚合酶，3 mmol/L Mg Cl2，0.4 mmol/L dNTP，反应缓冲液）等3个因素4个不同浓度水平L16（43）（表4）设计正交试验。PCR扩增程序为：94℃预变性5 min；94℃变性1 min，35℃复性1 min，72℃延伸1 min，共5个循环；94℃变性1 min，50℃复性1 min，72℃延伸1 min，35个循环；72℃温育10 min，4℃保存（王燕等，2007；邓波涛等，2009，现代农业科技，13(11）:2604-2609)。产物用6%非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳分离，恒功率80W电泳2 h，采用银染法显色。