《表3 LR反应体系：抗烟草丛顶病转基因烟草的培育》

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《抗烟草丛顶病转基因烟草的培育》

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将以上PCR产物胶回收纯化后，与TOPO载体进行连接转化及菌落PCR筛选后进行提纯质粒得到正确的重组质粒，再用限制性内切酶XhoⅠ和Bam HⅠ对重组质粒进行酶切，酶切后的目的片段与2B入门载体在T4 DNA连接酶作用下进行连接反应，通过筛选得到正确2B入门重组载体后，与目的表达载体PK7GW1GW2进行LR反应，反应条件为：25℃温育1 h后加1μL Proteinase K酶混匀，37℃温育10 min后转化大肠杆菌感受态细胞DH5α，同时对菌落进行PCR筛选得到含目的片段RNAi载体（表3）。