《表1 引物序列:不同结扎材料对慢性压迫性损伤模型胶质细胞活化的影响》

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《不同结扎材料对慢性压迫性损伤模型胶质细胞活化的影响》


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脊髓组织加入Trizol(25~50 mg组织加入500μL)后研磨粉碎,加入氯仿(1/5 Trizol体积),离心取上清,加入异丙醇(1/2Trizol体积),离心后弃上清,加入75%乙醇(等于Trizol体积)后吹干。取少量RNA进行浓度测定。根据测定的浓度进行稀释,按照试剂盒说明进行去除基因组DNA反应后,进行20μL体系的逆转录反应,反应条件为:37℃15 min,85℃5 s,4℃60 min。按照PCR试剂盒说明书中的Fast Real-time PCR System进行操作。采用50μL体系,反应条件为:预变性条件:95℃30 s;PCR反应条件:40,95℃5 s,60℃30 s。以GAPDH为内参,采用2-△△CT法进行数据的相对定量分析,ΔΔCT=待测样品中目的基因ΔCT—参照样品中目的基因ΔCT,表示目的基因mRNA的相对表达量。引物序列如表1。