《表1 NiV Taqman qRT-PCR可重复性分析》

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《尼帕病毒Taqman qRT-PCR检测方法的建立》

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转录获得的RNA标准品经检测浓度为5ng/μL，换算拷贝数为3.9×1010拷贝/μL，OD260/280比值为1.85，表明RNA标准品纯度较高。将标准品模板稀释成1.0×1010拷贝/μL，然后按照10倍倍比稀释，进行qRT-PCR扩增，获得扩增曲线。检测方法检测下限为102拷贝/μL，标准曲线线性范围为1.0×109拷贝/μL～1.0×102拷贝/μL，阴性对照无扩增，见图1A。标准曲线R2=0.995，表明线性关系较好，见图1B。应用该检测方法分别检测本科室保存的其他副黏病毒（人偏肺病毒、呼吸道合胞病毒、人副流感病毒3型和人副流感病毒4型）核酸，仅阳性对照出现扩增曲线，其他副黏病毒阳性样本及阴性对照均未出现阳性扩增（图2），表明本方法具有较好的特异性。对8个不同浓度梯度（109拷贝/μL～102拷贝/μL）的核酸样本进行四次重复试验，Ct值变异系数均小于5%，证明该方法稳定性和可重复性较好，结果见表1。