《软骨细胞的培养及鉴定：碱性成纤维细胞生长因子拮抗细胞外炎性因子保护软骨细胞》

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《碱性成纤维细胞生长因子拮抗细胞外炎性因子保护软骨细胞》

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大鼠采用10%水合氯醛腹腔过量注射麻醉致死，双下肢反复消毒，游离双侧股骨，彻底清除所附着软组织，分离出双股骨两端（股骨头及股骨髁）软骨组织，弯头镊子取出软骨块放于培养皿中，PBS冲洗杂质及血液、骨组织残渣；将软骨组织切碎成1 mm×1 mm小块，PBS冲洗，转移至50 m L离心管中，加入5 m L 0.02%Ⅱ型胶原酶、5 m L DMEM/F12培养基、500μL双抗，倾斜放置，在37℃，体积分数为5%CO2培养箱培养过夜；吹打均匀，经150目筛网过滤，收集细胞，1 000 r/min离心8 min，吸去上清，加入2.5 m L含体积分数为10%胎牛血清的DMEM/F12培养基，吹打均匀后接种于细胞培养瓶，放置于37℃，体积分数为5%CO2培养箱培养，倒置显微镜观察细胞形态及生长情况。经观察，原代细胞培养3 d后长到培养皿90%左右进行传代，PBS清洗，胰酶消化重悬，调整细胞浓度为6×109 L-1，接种于新培养瓶。