《表3 拯救的重组H5N6病毒的类型和数量》

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《G1-like与F/98-like进化谱系的P B2、M基因在H5N6亚型禽流感病毒重配中的竞争优势研究》

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注:PB2（S）+M（S）、PB2（S）+M（H）、PB2（H）+M（S）、PB2（H）+M（H）分别代表拯救重组H5N6 AIV的PB2和M基因组合情况分别为SS、SH、HS、HH。

各10质粒转染组拯救的各重组病毒第一轮空斑纯化的结果显示，病毒原液与10-1稀释度形成的空斑相对密集且部分融合，无法精确计算；病毒10-2稀释度可形成8～12个单个空斑；而10-3稀释度则无空斑形成。因此挑取10-2稀释度的6个重复孔内的全部单个空斑进行后续空斑纯化，共计挑取空斑数（即拯救的重组H5N6 AIV数量）为Group1（64个）、Group2（63个）、Group（56个）。由拯救的重组H5N6 AIV PB2和M基因测序结果显示，各10质粒转染组均可形成4种重组病毒，与预期相符（表3）。Group 1:MZ34（8）+F/98（PB2+M）质粒转染组拯救病毒的数据显示，4种重组H5N6 AIV数量由多至少依次为：PB2（S）+M（S）>PB2（S）+M（H）>PB2（H）+M（S）>PB2（H）+M（H）（图3），且G1-like PB2和M相较于F/98-like相应基因在数量上都占有绝对优势（图4A、图4B）。进一步为排除MZ34本身8个质粒易于自我包装的可能干扰，Group 2:MZ34（6）+YB0597（PB2+M）+F/98（PB2+M）质粒转染组将MZ34-PB2、MZ34-M替换为仍属G1-like谱系但来源于不同YB0597株的PB2和M，拯救病毒数据显示PB2（S）+M（S）重组病毒数量仍最多，但PB2（H）+M（S）重组病毒数量最少（图3）。然而，PB2和M基因的构成情况表明，G1-like PB2基因在数量上仍占绝对优势，G1-like M基因却无优势（图4A、图4B）。最后为确定G1-like PB2基因在前两组中表现出的竞争优势不受同一病毒株来源G1-like M基因的影响，即验证G1-like PB2和M基因之间是否存在叠加效应，在MZ34（6）+YB0597（PB2）+JT131（M）+F/98（PB2+M）质粒转染组中，将YB0597-M替换成仍为G1-like谱系但不同来源的JT131-M株，结果显示PB2（S）+M（S）重组病毒数量下降至第二位，不再具有明显优势（图3），但PB2和M基因的构成情况与Group2:MZ34（6）+YB0597（PB2+M）+F/98（PB2+M）质粒转染组结果一致（图4A、图4B）。表明，相较于F/98-like PB2与M基因，G1-like PB2基因在H5N6亚型AIV重配中具有更显著的竞争优势，G1-like M基因仅在MZ34（8）+F/98（PB2+M）质粒转染组表现出优势，且G1-like PB2与M基因间的优势叠加效应不明显。