《表4 FAP荧光探针结构及其动力学常数》

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《成纤维细胞活化蛋白的研究进展》

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近年来，荧光探针分子在体外靶酶的活性检测上有广泛的应用，包括细胞色素P450酶（cytochrome P450，CYP）、UDP-葡萄糖醛酸转移酶（UDP-glucuronosyltransferases，UGT）、二肽基肽酶和羧酸酯酶等[63-66].多种靶向FAP荧光探针被设计合成并在多项研究中得以应用（表4)[67-75]，例如Z-甘氨酸-脯氨酸-7-酰氨基-4-甲基香豆素（Z-Gly-Pro-AMC）、丙氨酸-脯氨酸-7-氨基-4-三氟甲基香豆素（Ala-Pro-AFC）等.目前，FAP的相关荧光探针多以香豆素为荧光基团.Aggarwal等[67]运用荧光探针Ala-Pro-AFC(500μmol/L）对FAP体外酶活性进行检测，通过其水解产生的AFC（λex/em=370/535 nm）的荧光响应来反应FAP活性，并测定了Ala-Pro-AFC的水解反应速率.但由于荧光探针自身化学属性差或选择性等问题，FAP难以与二肽基肽酶的其他成员活性进行区分.以Ala-Pro-AFC为例，由于丙氨酸的氨基端没有被阻隔，因此除了可以被具有内肽酶活性的酶（如FAP）水解外，外肽酶活性的酶（如DPP4）也能水解Ala-Pro-AFC产生AFC.除此之外，以香豆素结构为主的荧光基团其发射和激发波长多在300～500 nm，这与生物基质中的部分荧光蛋白质等成分的激发条件相重合，因此在具体的生物组织细胞实验中，由于生物基质的干扰，往往无法得到较好的荧光成像结果.Miao等[68]基于半菁类化合物结构，研究并合成了具有FAP特异性的荧光探针FNP1（水解产物λex/em=680/710 nm）.相较于前者的研究，Miao等补充了体外FAP单酶活性及选择性实验，证明了该探针并不会被DPP4水解，具有一定的选择性考证，但实验中用Talabostat作为抑制剂，会抑制多种二肽基肽酶的活性，在二肽基肽酶活性抑制作用上没有选择性，因此在FNP1选择性考察上还具有一定的提升空间，这些缺陷都限制了荧光探针在FAP深入研究中的应用.