《表1 研究用引物:胚乳对大麦苗期耐盐性的影响》
利用Trizol Reagent(Invitrogen)提取样品中总RNA后,通过SuperScript?III反转录酶(Invitrogen)反转录获得c DNA(徐红卫等2017)。采用7500 RealTime PCR System(Applied Biosystem)对大麦耐盐相关基因HvNHX1、HvNHX2、HvNHX3和HvH-KT1进行荧光定量PCR分析,以Actin和GAPDH为内参。其中,Hv NHX1、Hv NHX2和Hv NHX3的引物序列参考陆瑞菊等(2012)方法,HvHKT1、Actin和GAPDH的引物序列利用软件Primer 3.0设计,由北京六合华大基因科技有限公司合成,具体见表1。荧光定量PCR反应体系为20μL,包括2×power-up SYBR qPCR Mix(Toyobo)10μL,正反向引物(10μmol·L-1)各2μL,样品cDNA(约50 ng·μL-1)4μL,ddH2O 2μL;反应程序为:50°C保温2 min激活UNG酶,95°C预变性2 min,95°C变性15 s和60°C退火延伸1 min,40个循环数。
图表编号 | XD00114628800 严禁用于非法目的 |
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绘制时间 | 2019.10.20 |
作者 | 徐红卫、王亦菲、梁乔伟、黄赛华、刘成洪、黄剑华、马运涛、李锦斌、陆瑞菊、许如根 |
绘制单位 | 上海市农业科学院生物技术研究所、上海市农业遗传育种重点实验室、扬州大学农学院、上海市农业科学院生物技术研究所、上海市农业遗传育种重点实验室、苏州农业职业技术学院、上海市农业科学院生物技术研究所、上海市农业遗传育种重点实验室、上海市农业科学院生物技术研究所、上海市农业遗传育种重点实验室、上海市农业科学院生物技术研究所、上海市农业遗传育种重点实验室、苏州农业职业技术学院、上海海丰大丰种业有限公司、上海市农业科学院生物技术研究所、上海市农业遗传育种重点实验室、扬州大学农学院 |
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