《表2 HPLC分析CML及赖氨酸梯度洗脱程序》

  提示：宽带有限、当前游客访问压缩模式

本系列图表出处文件名：随高清版一同展现

《乳蛋白中可利用赖氨酸及其封闭产物含量的测定》

1. 获取 高清版本忘记账户？点击这里登录

1. 下载图表忘记账户？点击这里登录

mol/L

准确称取0.2 g左右（精确至0.0001 g）乳粉样品或0.5 g左右（精确至0.0001 g）液态乳于50 mL PTFE微波消解管中，加入3.5 mL硼酸钠缓冲液（0.2 mol/L，pH 9.5），混匀，再加入2 mL硼氢化钠溶液（1 mol/L溶于0.1 mol/L NaOH），室温下静置反应4 h。反应结束后，加入10 mL浓盐酸（37%）及5 mL水，涡旋混匀。充氮5 min后立刻旋紧盖子，于110℃烘箱中加热20h。取出冷却至室温后，使用50 wt%NaOH溶液调pH至8-9之间，加水至30 mL，样液经0.45μm尼龙滤膜过滤后以进行下述衍生反应。测定赖氨酸时，消解液需根据样品中氨基酸的含量进行适应倍数的稀释以确保赖氨酸的衍生完全。加入250μL硼酸钠缓冲液（0.2 mol/L，pH 9.5）于玻璃试管中，再加入50μL上述经过滤的样品溶液（或CML及赖氨酸标准溶液），涡旋混匀。加入250μL FMOC衍生试剂溶液（10 mg/mL溶于乙腈中，现用现配），涡旋混匀后，于室温下静置反应10 min。反应液经0.45μm尼龙滤膜过滤于进样小瓶中，加入500μL戊烷/乙酸乙酯（v戊烷∶v乙酸乙酯=9∶1），涡旋2次，每次10 s，以将过量的FMOC衍生试剂萃取至上层有机相，下层水相则含有经衍生的CML和赖氨酸。此进样小瓶直接进行HPLC分析。CML及赖氨酸标准溶液经过与样品相同的衍生步骤，进行HPLC分析并绘制标准曲线。使用安捷伦1260 HPLC配置荧光检测器进行分析。色谱柱为Zorbax SB C18（250 mm×4.6 mm I.D.，5μm），柱温20℃，进样量5μL，激发波长为262 nm，发射波长为310 nm。流动相A为0.05 mol/L柠檬酸钠缓冲液（p H 3.0）∶乙腈=825∶175；流动相B为水∶乙腈=1∶4。梯度洗脱程序见表2。