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第一节 实验误差的概念1

第二节 实验误差的种类、产生原因及其纠正办法1

一、系统误差1

(一)特征1

第一章 临床化学定量分析中的实验误差1

(二)来源2

(三)表现形式6

(一)来源7

(二)特征7

二、随机误差7

(四)纠正方法7

(三)纠正方法8

(四)抽样误差8

三、过失误差(责任误差)8

(一)来源8

(二)危害8

(三)纠正方法8

二、标准偏差9

一、平均误差9

第三节 实验误差的相互转化9

第四节 实验误差的表示方法9

三、绝对误差(偏差)10

四、相对误差(偏差)10

五、变异系数11

六、总误差和各步骤误差的估计11

第五节 实验误差的评价指标12

一、精密度12

(一)定义12

(二)不精密度12

(三)连续测定的精密度12

(四)重复性精密度13

(五)再现性精密度14

二、正确度15

三、准确度15

三、离群值的统计检验18

二、处理离群值的一般原则18

第六节 离群值的处理——过失误差的判断18

一、离群值的概念18

(一)检验离群值的理论依据19

(二)离群值的检验方法19

第二章 怎样选择和评价临床化学实验方法22

第一节 方法选择与评价的目的意义22

第二节 临床化学分析方法的分级及命名22

一、决定性方法23

二、参考方法23

三、常规方法或现场方法24

第三节 实验方法分析性能的评价26

一、实用性方法的选择26

(一)方法选择的原则26

(二)方法选择的具体步骤26

二、实用性方法的评价试验27

(一)精密度的估计27

(二)准确度和特异性的评价28

(三)检测能力的测定45

三、可接受性的判断47

(一)性能标准47

(二)性能标准的确定47

(三)性能标准的判断51

四、评价实验的书面报告61

五、评价后实验和方法的正式使用61

(一)评价后实验61

(二)正式交付使用前的准备工作61

第三章 实验室基础工作的质量保证63

第一节 实验用水的质量要求63

一、试剂级纯水的等级标准63

二、试剂级纯水的制备和用途65

三、试剂级纯水的贮存、运输和使用65

四、试剂级纯水的纯度检查65

(二)进口试剂规格66

(一)国产化学试剂的规格66

一、化学试剂66

第二节 试剂及试剂配制66

(三)特殊规格的试剂68

(四)选用试剂的原则68

(五)试剂的恒重和纯化68

(六)试剂的保管68

二、试剂的配制68

(一)试剂配制中的浓度表示方法68

(二)配制方法71

(三)标准酸碱溶液的配制与标定72

第三节 试剂盒及其质量的用户评估73

一、检查包装是否完整74

(一)外包装74

(二)内包装74

(三)说明书74

(四)线性范围的测定75

(三)干扰物试验75

(二)精密度的检验75

(一)准确度的测定75

三、对试剂盒所装试剂性能特征的评估75

二、对试剂盒所装试剂质量的初步评估75

(五)稳定性试验76

第四节 标准物质76

一、标准物质的基本概念76

二、标准物质的分类76

(一)按标准物质的性质和用途分类76

(二)按用户类型分类77

三、临床化学中的标准物质77

(一)临床化学中标准物质的分级77

(二)临床化学中标准物质应具备的条件77

(三)确定示值的途径78

(四)临床化学常用的标准物质78

二、常用量器的允差标准81

(四)量器的级别81

(三)完全流出式与不完全流出式81

(一)标准温度与标称容量81

一、与量器有关的几个概念81

第五节 常用量器的校正与正确使用81

(二)量入式和量出式81

三、量器校正82

(一)基本方法82

(二)容量瓶的校正83

(三)滴定管的校正83

(四)吸量管的校正84

(五)微量吸管的校正84

(六)取液器的校正和监测85

四、常见量器的正确使用85

(一)容量瓶85

(二)量筒85

(五)移液吸管86

(六)取液器86

(三)有分度吸量管86

(四)奥氏吸管86

第六节 常规仪器的检定与正确使用87

一、分光光度计87

(一)波长校正87

(二)线性检查89

(三)杂光检测89

(四)比色杯的配套性检查90

(七)正确使用91

(五)稳定性的检定91

(六)吸光度校正91

二、分析天平92

(一)天平的精度分级92

(二)天平的正确使用92

(三)天平的维护保养93

(四)天平的检定93

(二)准确度94

(一)检出限和测定范围94

第一节 血清总蛋白含量测定94

一、微量凯氏定氮法94

第四章 蛋白质测定94

(三)精密度95

(四)用作血清蛋白标准品定值方法的不准确性因素95

二、双缩脲法96

(一)试剂配方的选择与评价96

(二)标化测定98

(三)蛋白标准液的标化99

(四)常规测定方法的标准化100

(五)方法的可靠性100

三、酚试剂法105

(一)试剂组方的比较105

(二)蛋白标准液106

(三)标准工作曲线的制备106

(四)方法的分析性能107

四、紫外吸收法108

第二节 血清白蛋白测定109

一、溴甲酚绿法109

(一)试剂标准化问题109

(二)标准品的选择113

(三)显色时间对测定值的影响114

(四)影响测定准确性的其它因素114

(五)与其它参比方法的对比115

二、溴甲酚紫法116

(一)BCP与血清白蛋白反应的特异性116

(二)与其它参比方法的对照118

(三)温度对呈色的影响118

(四)准确度118

(五)重复性118

(六)干扰118

三、乙醛酸法119

第三节 血浆纤维蛋白原测定119

(七)BCP与牛、猪血清的反应119

一、亚硫酸钠盐析双缩脲比色法121

二、凝块分离双缩脲比色法122

三、热沉淀比浊法122

(一)试剂(缓冲液)配方的选择122

(二)方法的分析性能122

四、硫酸铵—EDTA比浊法124

(一)显浊液配方的选择124

(二)方法的分析性能125

五、考马斯亮兰微量比色测定法126

(一)沉淀剂的选择126

(二)方法性能126

第四节 尿蛋白总量测定127

一、尿蛋白总量测定方法的评价127

(一)磺基水杨酸法127

(三)钨酸法128

(二)三氯醋酸法128

(四)海胺1622法129

(五)双缩脲比色法129

(六)酚试剂比色法129

(七)丹宁酸—氯化铁比色法130

(八)丽春红蛋白结合法130

(九)考马斯亮兰G—250法130

(十)邻苯三酚红—钼酸盐法132

(一)健康人及病理性尿蛋白组份的构成特征133

(十一)半定量试纸法133

二、尿蛋白总量测定标准物的选择应用133

(二)不同组份标准品对测定结果的影响135

(三)标准品的选择应用135

第五节 脑脊液蛋白质总量测定138

一、正常脑脊液蛋白组份的构成特征138

二、常规方法的评价139

(一)标本选择141

一、血糖标本141

(二)抗凝剂和血糖保护剂的选择141

第一节 标本的选择、处理及保存141

第五章 糖及其代谢产物测定141

二、乳酸和丙酮酸测定标本142

(一)测定乳酸的标本142

(二)丙酮酸测定的标本143

第二节 血浆葡萄糖测定143

一、邻甲苯胺法145

(一)测定方法的历史和现状145

(二)实验条件探讨145

(三)方法可靠性147

二、葡萄糖氧化酶法148

(一)测定方法的历史和现状148

(二)关于Trinder反应148

(三)GOD—POD法试剂盒的质量标准与评价149

(四)国家卫生部推荐的GOD—POD法与Tirnder改良法的实验条件151

(五)方法可靠性151

(一)测定方法的历史和现状152

三、己糖激酶法152

(二)实验条件与试剂要求153

(三)方法可靠性154

第三节 乳酸和丙酮酸的酶法测定155

一、乳酸的酶法测定155

(一)分析方法的发展历史与现状155

(二)酶比色法的反应原理与实验条件156

(一)测定方法的历史与现状158

二、丙酮酸的酶法分析158

(三)方法可靠性158

(二)方法可靠性159

第六章 无机离子测定161

第一节 钾钠离子测定161

一、火焰原子发射光谱法161

(一)钾钠原子的特征性发射光谱161

(二)内标准法的优越性161

(三)参考方法的主要技术要求161

(二)方法分类163

(一)钾、钠离子选择电极的结构与响应特性163

二、离子选择电极电位测定法163

三、对钾钠测定FAES法和ISE法的评价164

(一)方法对比试验164

(二)干扰因素165

四、钾、钠的酶法测定166

(一)钾的酶法测定166

(二)钠的酶法测定166

五、标本的采集和贮存167

(一)仪器工作原理168

第二节 氯测定168

一、库仑滴定法168

(二)技术关键169

(三)方法分析性能169

二、硫氰酸汞比色法171

(一)试剂组成与反应条件171

(二)方法分析性能172

三、硝酸汞滴定法172

(二)方法分析性能174

(一)测定原理174

四、离子选择电极法174

五、酶法测定174

第三节 钙的测定175

一、分析方法现状175

二、对总钙分析方法的评价176

(一)原子吸收光谱法176

(二)邻甲酚酞络合酮比色法177

(三)甲基麝香草酚兰比色法178

(四)络合滴定法179

第四节 无机磷测定180

一、分析方法现状180

(一)还原法180

(二)非还原法182

(三)酶法183

二、代表性分析方法的方法学评价183

(一)硫酸亚铁铵法183

(三)邻苯二胺法184

(二)米吐尔直接显色法184

(四)孔雀绿直接显色法185

(五)结晶紫试剂法186

(六)紫外法186

(七)黄嘌呤氧化酶法188

第五节 血清镁测定189

一、中子活化同位素稀释法189

二、原子吸收分光光谱法189

三、甲基麝香草酚兰比色法189

四、Calmagite染料比色法190

五、钛黄比色法191

六、HK—G6PDH偶联法192

第六节 血清铁测定193

一、不除蛋白的亚铁嗪法195

二、除蛋白亚铁嗪法195

第一节 概述197

一、关于酶活性浓度测定的推荐方法197

第七章 酶类测定197

二、常用名词术语198

(一)酶(催化)活性浓度198

(二)活性单位198

(三)“连续监测法”和“动态法”198

(六)同工酶199

(七)Km199

(五)测定酶、指示酶、辅助酶199

(四)最适条件199

(八)反应初速度200

(九)反应级数200

三、反应温度201

四、样品采集、贮存和高酶活性样品的稀释201

(一)溶血201

(二)抗凝剂202

(三)酶的稳定性和贮存条件202

(四)高酶活性血清样品的稀释203

(一)测定方法的历史和现状204

第二节 常用酶活性浓度测定204

一、丙氨酸氨基转移酶204

(二)连续监测法205

(三)比色法208

(四)标本212

二、天冬氨酸氨基转移酶212

(一)测定方法的历史和现状212

(二)连续监测法213

(三)比色法215

(四)标本215

三、碱性磷酸酶215

(一)测定方法的历史和现状216

(二)连续监测法217

(三)磷酸苯二钠比色法219

(四)标本220

四、酸性磷酸酶220

(一)测定方法的历史和现状220

(二)连续监测法221

(三)比色法223

(四)标本223

五、乳酸脱氢酶224

(一)测定方法的历史和现状224

(二)连续监测法225

(三)比色法227

(四)标本227

六、γ—谷氨酰(基)转移酶227

(一)测定方法的历史和现状228

(二)连续监测法228

(三)比色法230

(四)标本231

七、淀粉酶231

(一)测定方法的历史和现状231

(二)碘—淀粉比色法233

(一)测定方法的历史和现状234

八、肌酸激酶234

(三)标本234

(二)连续监测法235

(三)肌酸比色法236

(四)标本236

第三节 同工酶测定238

一、同工酶的概念238

二、临床常用同工酶的分离测定方法239

(一)电泳法239

(二)色谱法240

(三)免疫学法240

(四)动力学法241

三、临床常用同工酶的测定241

(一)肌酸激酶同工酶241

(二)乳酸脱氢酶同工酶243

第一节 血清总胆固醇测定245

一、测定方法的历史和现状245

第八章 血脂、脂蛋白和载脂蛋白测定245

二、方法分级246

(一)决定性方法246

(二)参考方法246

(三)常规方法247

三、传统的强酸试剂显色法247

(一)基本显色反应的评价247

(三)修改的LRC法的评价249

(二)测定方法的分类249

四、酶法250

(一)酶法测定胆固醇的反应步骤251

(二)工具酶的来源和特性251

(三)测定方法的分类251

(四)应用国产酶试剂分析法252

五、样品采集、贮存及稳定性255

第二节 血清甘油三酯测定256

一、测定方法的历史和现状256

(二)化学法的基本步骤257

(一)化学测定法的常用方法257

二、化学测定法257

(三)异丙醇抽提—乙酰丙酮显色法258

三、酶法260

(一)基本反应260

(二)干扰因素262

(三)国内常规酶法的评价264

四、标本采集和保存265

第三节 血清脂蛋白分析266

一、分析方法的现状267

二、血清脂蛋白琼脂糖电泳268

(一)脂蛋白的染色269

(二)电泳条件269

(三)结果判断方式269

(四)标本269

(一)分析方法的现状270

(二)HDL的选择性沉淀分离270

第四节 高密度脂蛋白及其亚组份胆固醇测定270

一、高密度脂蛋白胆固醇测定270

(三)关于胆固醇测定272

二、HDL亚组份胆固醇测定272

(一)分析方法的现状272

(二)聚乙二醇20000沉淀法272

第五节 血清低密度脂蛋白胆固醇测定273

一、分析方法的现状274

(三)沉淀LDL的实验条件276

(五)方法的分析性能276

(四)胆固醇测定方法276

(一)基本原理276

(二)试剂组方276

二、PVS法276

三、Friedewald计算法的评价277

(一)建立F公式的依据277

(二)Friedewald计算法存在的问题277

(三)关于对F公式的修改意见277

(四)对计算法实用性的倾向性结论278

第六节 载脂蛋白测定279

二、载脂蛋白免疫测定方法中存在的问题280

(一)抗原问题280

一、测定方法的现状280

(二)抗体问题281

(三)参考标准问题282

三、各种载脂蛋白免疫测定法的优缺点282

(一)单向免疫扩散法282

(二)火箭电泳法282

(三)放射免疫法282

(四)酶联免疫测定法283

(五)比浊测定法283

四、临床常用免疫测定法的评价283

(一)血清apoAI及B的免疫透射比浊法测定283

(二)血清载脂蛋白AI及B的火箭电泳测定法284

(三)载脂蛋白(a)的酶联免疫测定法285

第一节 血清尿素测定287

一、测定方法现状287

第九章 非蛋白质氮类化合物测定287

二、几种测定尿素常规方法的方法学评价288

(一)二乙酰一肟法288

(二)尿素酶Berthelot法288

(三)酶偶联速率法290

二、几种常用肌酐测定方法的评价292

(一)碱性苦味酸比色法292

一、分析方法现状292

第二节 血清肌酐测定292

(二)漂白土碱性苦味酸法293

(三)速率法294

(四)酶法295

第三节 尿酸测定296

一、尿酸酶紫外吸收法297

(一)方法的发展历史与现状297

(二)主要反应及测试条件297

(三)分析性能的可靠性297

(二)方法的可靠性299

二、尿酸酶—POD偶联比色法299

(一)测定方法的历史和现状299

三、磷钨酸法300

(一)测定方法的历史和现状300

(二)方法的可靠性300

第十章 肝功能试验303

第一节 血清胆红素测定303

一、改良J—G法304

(一)测定方法的历史和现状304

(二)试剂与方法的标准化305

(三)方法的可靠性310

二、胆红素氧化酶法310

(一)测定方法的历史和现状310

(二)方法的可靠性311

(三)结合胆红素的酶法测定311

(二)血氨的“真值”问题313

(一)标本的采集与保存313

一、概述313

第二节 血氨测定313

二、对常用血氨测定方法分析性能的评价314

(一)直接显色法314

(二)谷氨酸脱氢酶速率法316

(三)离子交换法316

(四)氨电极法316

第一节 化学测定法319

第十一章 激素及其代谢产物的测定319

一、尿液香草基杏仁酸测定320

(一)分析方法的现状320

(二)对硝基苯胺法321

二、尿液17—酮类固醇测定322

(一)分析原理和方法现状322

(二)参考方法和建议采用的方法323

(三)对Zimmermann反应间二硝基苯法的评价323

(二)分析性能的评价324

(一)分析原理与方法现状324

三、尿17—羟皮质类固醇测定324

第二节 放射免疫测定法325

一、放射免疫分析技术的发展与现状325

二、竞争性结合分析法的基本原理326

三、剂量反应曲线的数据处理327

(一)对纵坐标参数的计算327

(三)剂量反应曲线的拟合328

四、RIA方法的主要性能指标328

(二)半对数坐标绘图法328

五、几种常用RIA分析方法的评价329

(一)125Ⅰ标记T4放免测定329

(二)人血清生长激素单克隆抗体RIA测定329

(三)3H标记血浆醛固酮微量直接放免测定329

(四)125Ⅰ标记cGMP放射免疫测定330

(五)3H标记血浆血栓素B2放射免疫测定330

第十二章 临床药物监测332

第一节 概述332

第二节 抗癫痫药物333

二、实验条件的选择334

(一)仪器配置334

(二)分析柱334

(三)样品预处理334

(四)流动相组成和流速334

(五)标准品及标准曲线334

一、测定原理334

(九)定量方法335

(十)内标准物质的选择原则和来源335

(七)进样量的确定335

(八)量程与记录仪335

(六)检测波长的确定335

三、方法分析性能336

第三节 三环类抗抑郁药336

一、HPLC法分析TCAs的实验条件337

二、HPLC法分析性能338

(一)放射免疫分析法339

第四节 环孢霉素339

一、实验条件的选择339

(二)HPLC法341

二、方法可靠性342

第五节 抗心律失常药342

第六节 地高辛测定344

第七节 氨基糖苷类抗菌素345

第八节 茶碱347

第十三章 尿蛋白组分PAGE定量检测法的方法学探讨350

第一节 概述350

一、方法的发展历史与应用现状350

二、PAGE的优点和分类350

三、SDS的作用351

四、催化剂催化凝胶聚合的机理352

五、凝胶配方中尿素的作用352

第二节 适用于尿蛋白组分定量电泳分析的凝胶配方与聚合条件的控制352

一、凝胶配方352

二、凝胶溶液中单体浓度的选择353

三、凝胶聚合条件的探讨355

第三节 样品预处理及标志蛋白质的选择与使用356

一、样品缓冲液356

二、尿样品的预处理357

三、标志蛋白质的选择和标准工作曲线的数据处理357

第四节 电泳、染色及扫描定量358

一、加样358

(一)考马斯亮兰R250染色法360

(二)铬银染色法360

三、染色方法的选择与评价360

二、电泳360

(三)其它染色法361

四、扫描的技术指标与两种染色法扫描一致性观察361

第五节 为铬银染色SDS—PAGE方法临床应用所作的基础研究工作363

一、健康人血清蛋白组份参考值的调查363

二、健康人尿蛋白组份参考值的调查363

三、诊断标准364