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第一章放射配体分析1

第一节放射配体分析的基本原理、技术条件、质量控制及有关问题1

一、放射配体分析的基本原理1

二、抗原和标准品2

三、抗血清的制备和鉴定5

四、抗原的标记7

五、加样程序及分离技术8

六、标准曲线、Scatchard作图及K值10

七、放射免疫分析中的质量控制13

八、放射免疫分析的有关问题16

第二节放射免疫测定18

一、促甲状腺激素、滤泡刺激素、促黄体激素、生长激素和催乳素氯胺T碘化标记18

二、促甲状腺激素、滤泡刺激素、促黄体激素、生长激素和催乳素放射免疫测定19

三、睾丸酮放射免疫测定20

四、抑制素放射免疫测定22

五、孕酮放射免疫测定23

六、雌二醇放射免疫测定25

七、三碘甲状腺原氨酸（T3）放射免疫测定27

八、甲状腺素（T4）放射免疫测定28

九、促肾上腺皮质激素（ACTH）的碘化标记及其放射免疫测定29

十、β-内啡呔（β-EP）的碘化标记及其放射免疫测定33

十一、脑组织中神经肽放射免疫测定35

十二、胰岛素放射免疫（双抗体法）测定39

十三、粒细胞集落刺激因子（G-CSF）的氯胺T碘化法40

十四、蛋白质酶促放射性标记法42

十五、环磷酸鸟苷放射免疫测定43

第三节竞争性蛋白质结合分析45

一、皮质醇（酮）测定45

二、环磷酸腺苷蛋白质结合测定46

第四节放射受体分析48

一、大鼠脾细胞糖皮质激素受体分析48

二、大鼠肝细胞糖皮质激素受体分析50

三、雌二醇受体分析52

四、应用125I标记ACTH进行免疫细胞受体分析53

第二章组织培养技术57

第一节组织培养基本知识、实验室条件、培养用液及培养技术57

一、组织培养概念57

二、组织培养实验室设计和设备61

三、培养用液63

四、清洗与消毒67

五、培养基本要领和操作要求69

第二节细胞、组织培养74

一、大鼠垂体细胞单层培养及其分泌功能测定74

二、Leydig细胞及Sertoli细胞离体培养75

三、大鼠卵巢颗粒细胞单层培养及其功能的测定76

四、肾上腺组织制备及培养78

五、粒-巨噬系造血祖细胞体外培养79

六、人骨髓成纤维细胞集落形成培养80

七、小鼠脾淋巴细胞混合培养81

八、人周围血液单核细胞分离83

九、悬浮细胞在半固体琼脂内集落形成86

第三节杂交瘤技术88

一、杂交瘤技术的基本原理88

二、实验材料和方法89

三、杂交瘤细胞的制备90

四、杂交瘤细胞的选择性培养92

五、杂交瘤细胞的筛选93

六、杂交瘤细胞的克隆化96

七、单克隆抗体的制备98

八、杂交瘤细胞的冻存和复苏99

九、污染和控制100

十、单克隆抗体的特性101

十一、单克隆抗体的纯化102

十二、筛选和鉴定单克隆抗体的方法105

附 聚乙二醇溶液、阿氏液、2-巯基乙醇溶液及几种染液配制112

第三章细胞遗传学实验技术114

第一节人淋巴细胞染色体技术114

一、常规制备人外周血淋巴细胞染色体标本114

二、姊妹染色单体差别染色116

附 BudR参入后细胞分裂周期鉴别及SCE分析117

三、人外周血淋巴细胞微核标本制备118

附 微核判定标准119

第二节哺乳动物体细胞染色体标本制备方法119

一、家兔外周血染色体标本制备119

二、小鼠骨髓细胞染色体标本制备120

三、小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验122

第三节生殖细胞染色体标本制备123

一、雄性生殖细胞染色体标本制备123

二、雌性生殖细胞染色体标本制备126

第四节染色体畸变类型和判定标准127

一、人类染色体畸变类型127

二、小鼠染色体畸变类型128

第四章分子生物学实验技术132

第一节制备转基因小鼠技术132

一、真核细胞DNA的快速制备132

二、真核细胞DNA制备的一般方法133

三、组织和培养细胞DNA提取、制备134

四、限制性内切酶135

五、琼脂糖凝胶电泳137

六、Southem转印138

七、缺口翻译139

八、DNA分子杂交（Southern转印杂交）140

九、细菌的转化141

十、质粒DN A制备——Triton-Lysozyme法143

十一、异硫氰酸胍法提取制备总RNA145

十二、聚丙酰胺序列电泳凝胶的制备146

十三、S1核酸酶保护测定147

十四、转基因小鼠的制备152

第二节确定四膜虫rDNA特异序列位置技术156

一、四膜虫rRNA基因（rDNA）提取156

二、应用琼脂糖凝胶电泳纯化四膜虫rDN A片段157

三、Southern转移确定四膜虫rDNA特异序列位置159

四、应用分子杂交进一步确定四膜虫rDNA特异序列位置160

第三节几种检测DNA损伤技术162

一、快速测定DNA损伤方法162

二、DNA聚合酶活性测定163

三、外周血淋巴细胞DNA非程序合成测定（液闪法）164

第四节有关rRNA合成测定及mRNA体外翻译技术165

一、四膜虫核糖体RNA合成的测定165

二、ConA活化淋巴母细胞mRNA的体外翻译技术167

第五章免疫学实验技术170

第一节免疫沉淀反应170

一、血清中IgG、IgA和IgM测定（琼脂单相免疫扩散法）170

二、双向免疫扩散172

三、免疫电泳173

第二节T淋巴细胞功能测定175

一、E玫瑰花结反应——一种计数T淋巴细胞方法175

二、人T细胞亚群（Tr、Tμ）检测176

三、α-醋酸萘酯酶（ANAE）染色检测T淋巴细胞178

四、淋巴细胞转化试验3H-TdR参入法（微量全血法）180

附氚衰变表181

五、淋巴细胞转化试验形态学方法182

六、双重双标记法检测淋巴细胞内三种大分子合成184

七、单克隆抗体免疫荧光染色及流式细胞仪检测脾脏淋巴细胞亚群184

第三节B淋巴细胞功能测定186

一、酵母多糖-补体3复合物花环形成法（ZYC花环形成法）——一种检测B细胞方法186

二、溶血空斑试验（液相单层玻片法）187

第四节淋巴因子测定189

一、胸腺细胞对白细胞介素1反应性测定189

二、脾细胞IL-2产生及活性测定190

三、小鼠肿瘤坏死因子的诱生及检测191

四、干扰素活性测定192

第五节细胞毒技术196

一、抗体依赖细胞介导的细胞毒（ADDC）活性测定196

二、小鼠脾脏NK细胞活性测定198

三、淋巴因子激活的杀伤细胞（LAK细胞）活性测定（125I-UdR释放法）199

第六节免疫组织化学及放射自显影术200

一、组织石蜡切片200

二、免疫组织化学技术202

三、细胞贴附放射自显影术205

四、组织切片放射自显影术206

第六章蛋白质及其他物质提取、纯化、鉴定及其测定技术209

第一节蛋白质及酶的提取和纯化209

一、组织细胞破碎209

二、样品的浓缩、干燥和保存210

三、蛋白质及酶的提取和纯化211

第二节层析技术213

一、纸层析213

二、薄层层析214

三、应用薄层吸附层析法检查氚标地基米松放化纯度215

四、凝胶层析216

五、离子交换层析221

第三节电泳技术225

一、十二烷基磺酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）225

二、聚丙烯酰胺等电聚焦电泳227

第四节几种蛋白质的制备及其测定228

一、滤泡刺激素的提取、纯化及其生物学特性测定228

二、动物垂体促黄体激素的分离和纯化229

三、抑制素的制备及其生物活性测定231

四、免疫球蛋白IgG的提取、纯化和羊抗兔IgG的制备232

五、植物血球凝集素（PHA）的制备235

六、蛋白质定量测定——Lowry氏法236

七、应用紫外光吸收法计算蛋白质浓度237

第五节组织中自由基及其抗氧化酶测定238

一、体内的自由基反应238

二、组织中自由基的测定——电子自旋共振法241

三、TBA显色法测定组织中过氧化脂质242

四、化学发光法测定组织中超氧化物歧化酶243

五、DTNB直接法测定血液和组织中谷胱甘肽过氧化物酶活力244

第六节色氨酸、抗坏血酸测定及氚化5-羟色胺在体内组织中分布实验246

一、应用分光光度法测定游离或结合色氨酸246

二、肾上腺抗坏血酸测定247

三、氚化5-羟色胺在下丘脑、垂体及肾上腺中分布实验248

第七章仪器使用及动物模型建立250

第一节液体闪烁计数仪及γ计数仪250

一、液体闪烁计数仪的主要部件和使用250

二、γ计数仪的主要部件和使用253

第二节高效液相色谱法及其应用技术257

一、概述257

二、液相色谱法的基本原理258

三、色谱柱及其参数的选择260

四、检测器261

五、定性与定量方法262

六、高效液相色谱分离类型的选择264

七、HPLC法测定组织中单胺类化合物264

八、反相HPLC荧光检测法检测人血浆中α-生育酚265

九、吉林红参中多肽的HPLC法分离266

十、氨基酸的高效液相色谱分析266

第三节气相色谱法及其在医学研究的应用267

一、气相色谱法基本原理267

二、气相色谱仪的组成268

三、气相色谱法的定性与定量分析272

四、气相色谱法在医学上的应用272

第四节双光束紫外可见分光光度计及分光光度法的应用274

一、分光光度法的基本原理274

二、双光束紫外-可见分光光度计构造274

三、分光光度法275

四、分光光度法的应用276

第五节荧光分析法及荧光分光光度计的应用278

一、概述278

二、化学结构和荧光278

三、浓度与荧光强度的关系279

四、荧光仪器279

五、荧光分析的应用282

六、荧光法测定核黄素（维生素B2）282

七、荧光法测定组织中吲哚胺283

第六节流式细胞仪原理与应用284

一、流式细胞仪的工作原理和基本构造284

二、细胞的分析与分选285

三、流式细胞仪主要特点285

四、流式细胞术的应用范围及样品测定步骤285

五、样品制备287

六、微量全血溶解染色法测量T淋巴细胞亚群（间接荧光法）289

七、单荧光染色的细胞周期测定方法290

第七节原子吸收分光光度计及应用原子吸收分光光度法测定发锌含量290

一、原子吸收分光光度计的工作原理291

二、原子吸收分光光度计291

三、毛发中锌的测定——火焰原子吸收分光光度法293

第八节多道分析器及其核分析技术在生物医学中的应用294

一、多道分析器的工作原理294

二、核分析方法概述295

三、中子活化分析295

四、同位素源激发X射线荧光分析296

第九节超薄切片机及超薄切片术302

一、超薄切片机302

二、标本的制作302

三、超薄切片步骤303

四、制备优良的超薄切片条件305

五、超薄切片的常规染色法305

六、半薄切片的制作及染色306

第十节超速离心机及菲利普深部X光治疗机的应用306

一、超速离心机的使用306

二、菲利普深部X光治疗机在实验中的应用308

第十一节动物模型的建立310

一、小鼠实体瘤模型制备310

二、大鼠去垂体术311

三、大鼠睾丸摘除术312

四、初生期大鼠胸腺摘除术312

五、鼠类动物弓状核药物损毁模型313

六、吗啡耐受动物模型313

七、大鼠肾上腺摘除术314

第十二节大鼠脑立体定位315

一、大鼠脑立体定位术315

二、大鼠第三脑室定位插管315

第十三节大鼠剖腹探查及颈静脉插管316

一、大鼠剂腹探查诊断妊娠316

二、大鼠颈静脉插管术317

第八章医学生物学中的数学模型及其计算机拟合318

第一节数学模型319

一、数学模型的分类及建立数学模型的方法与步骤319

二、医学生物学中的数学模型实例321

第二节计算机拟合程序337

一、XFIT单变量的最小二乘拟合337

二、LINFIT直线的最小二乘拟合338

三、POLFIT多项式的最小二乘拟合340

四、LEGFIT勒让德多项式的最小二乘拟合343

五、REGRES多重线性回归拟合348

六、FCTN用于REGRES的幂级数拟合函数352

七、FCTN用于REGRES的勒让德多项式拟合函数353

八、FCHISQ拟合的约化x2 x2u354

九、GRIDLS非线性函数网格寻优最小二乘拟合356

十、FUNCTN（高斯函数＋二次多项式）非线性拟合函数358

十一、GRADLS非线性函数的梯度寻优最小二乘拟合359

十二、CHIFIT采用x2抛物线外推法的最小二乘拟合362

十三、CURFIT拟合函数线性化的最小二乘拟合366

十四、FDERIV（高斯函数＋二次多项式）拟合函数的导数370

十五、FDERIV无解析形式的拟合函数的导数371

十六、SMOOTH平滑化过程372

十七、INTERP数据的内插与外推373

十八、AREA面积的数值积分375

十九、INTEG面积积分子程序377

二十、DETERM方矩阵的行列式378

二十一、MATINV矩阵求逆380

附录383

1常用缓冲液配制、药物浓度计算、酒精稀释法、各种酸碱浓度及人工培养基383

一、常用缓冲液配制383

二、药物浓度计算388

三、酒精稀释法389

四、各种酸碱浓度389

五、常用人工合成培养基390

2化学试剂分级、激素国际标准、国外测定药盒及激素正常值391

一、化学试剂分级391

二、激素的国际标准和国际参考制剂392

三、国外测定药盒的指标值394

四、人体26种激素正常值396

3冷却剂、干燥剂、需特殊保存的试剂、指示剂、滤纸、滤膜及相对离心力换算402

一、冷却剂402

二、干燥剂402

三、硝酸纤维素膜与尼龙膜的比较表403

四、易变质和需用特殊方法保存的常用试剂404

五、常用酸碱和混合指示剂405

六、层析滤纸的规格与性能407

七、离心转数与相对离心力（g）的换算407

4度量衡单位、医学许用和非许用单位及医学检验新旧单位换算408

一、常量、微量和超微量度、量、衡单位名称408

二、与医学有关的许用和非许用单位409

三、医学检验新旧单位换算414

5辐射剂量单位、放射性衰变表及放射性去污方法434

一、辐射剂量单位434

二、放射性衰变表438

三、放射性去污方法441

6动物近交品系命名法、精液采取法、肿瘤接种法、常用麻醉剂、主要传染病及某些生物学数据442

一、近交品系命名法442

二、各种动物精液采取方法和精液特点444

三、常用动物肿瘤接种方法444

四、动物常用麻醉剂445

五、动物主要易患传染病446

六、成年动物正常体温、呼吸、脉博、尿比重、体表面积及血压值447

七、实验动物红细胞、血红蛋白、白细胞及血小板数449

八、实验动物生化指标参考值452

九、实验动物染色体数目、正常组织细胞分裂各间期的时间及细胞更新速度454

十、不同种类生物的LD50456

十一、实验动物繁殖生理数据及其寿命457

十二、实验动物重要脏器重量、与体重之比以及年龄与体重的关系459

十三、实验动物饲料、饮水要求量和排便排尿量及1次灌胃能耐受的最大容量461

十四、实验动物的营养需要量、循环时间及所需的活动面积462

十五、供实验用的各种动物体重要求及采血量463