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第一章 生物显微技术的发展和电子显微镜技术的广泛应用1

第一节 生物显微技术的发展1

第二节 电子显微镜在生物学上的应用6

一、病毒学方面6

二、细胞学方面7

三、植物学方面7

四、分子生物学方面8

五、病理学方面8

六、环境污染和职业病研究方面8

七、考古学方面8

参考文献9

第二章 透射式电子显微镜的基本原理和结构10

第一节 电子枪10

第二节 电磁透镜12

第三节 图像观察和记录系统18

第四节 真空系统19

第五节 供电系统22

参考文献24

第三章 超薄切片技术25

第一节 概述25

第二节 取材和细切27

第三节 固定29

一、固定的目的29

二、固定液、缓冲液和附加剂29

三、缓冲液及其配制30

四、固定液及其配制37

五、固定的方法44

第四节 漂洗和脱水57

一、漂洗和脱水的程序57

二、组织块染色60

第五节 浸透和包埋61

一、包埋介质概述61

二、浸透和包埋的方法72

第六节 切片78

一、载网及其清洗法78

二、支持膜及其制作法80

三、修整包埋块86

四、制作玻璃刀88

五、金刚刀的使用与保养92

六、超薄切片机94

七、切片操作步骤96

第七节 染色99

一、醋酸铀染色100

二、柠檬酸铅染色101

第八节 操作程序举例103

一、水稻叶片和荔枝花药样品制备103

二、花生叶片样品制备104

三、真菌菌丝及其宿主植物根组织样品制备104

参考文献105

第四章 植物塑料厚切片技术107

第一节 概述107

第二节 环氧树脂厚切片制作法109

第三节 环氧树脂厚切片染色法112

一、天青B染色(Hoefert,1968)112

二、碱性品红和亚甲蓝染色(Sato and Sha-moto,1973)113

三、苏丹B黑染色(Parham and Kaustinen,1976)113

第四节 乙二醇甲基丙烯酸酯厚切片制作法114

第五节 GMA厚切片染色法118

一、甲苯胺蓝染色法118

二、酸性品红和甲苯胺蓝染色法119

三、苏木精染色法119

参考文献120

第五章 负染色技术121

第一节 负染色的一般概念121

第二节 负染色液的配制123

第三节 负染色方法125

一、滴染法125

二、喷雾法126

三、漂浮法127

第四节 一些生物样品负染色操作法举例127

一、蛋白质分子和核糖体的负染色127

二、病毒的负染色129

三、细菌的负染色130

参考文献130

第六章 复型技术和投影技术132

第一节 复型技术中的基本方法132

第二节 投影技术134

一、投影的基本概念134

二、投影所用的蒸发材料136

第三节 蒸发的方法137

第四节 复型和投影样品制作法举例139

一、小颗粒样品的复型法(perkins and koehler,1978)139

二、云母底子技术(Hall,1966年的修改法)141

参考文献141

第七章 冷冻固定技术143

第一节 冷冻固定的目的和意义143

第二节 生物样品内的水和结冰144

第三节 植物样品的预处理145

一、分离的细胞和细胞成分的预处理145

二、植物组织和器官的预处理148

第四节 冷冻的方法149

一、浸没法149

二、喷雾冷冻法152

三、样品喷射冷冻法153

四、液体石蜡法153

五、夹心冷冻法154

六、金属接触法154

参考文献155

第八章 冷冻干燥技术157

第一节 冷冻干燥的基本原理157

第二节 冷冻干燥操作程序159

参考文献162

第九章 冷冻取代技术163

第一节 概述163

第二节 冷冻取代液165

第三节 最简单的冷冻取代装置166

第四节 冷冻取代操作程序168

一、制备冷冻取代样品的超薄切片168

二、米勒的冷冻取代操作程序169

参考文献170

第十章 冷冻超薄切片技术171

第一节 概述171

第二节 冷冻超薄切片机173

一、低温恒温箱式冷冻超薄切片机173

二、冷冻附件式冷冻超薄切片机174

第三节 冷冻超薄切片操作程序179

一、取材和预处理180

二、把样品装在支持物上181

三、冷冻182

四、把样品装到超薄切片机上183

五、切片及后处理184

参考文献187

第十一章 冷冻复型电镜技术188

第一节 概述188

第二节 冷冻蚀刻机简介190

第三节 冷冻复型操作程序193

一、取材和预处理193

二、冷冻194

三、断裂197

四、蚀刻197

五、喷镀199

六、分离和清洗复型膜200

第四节 断裂面及其命名202

第五节 冷冻复型技术在植物学研究中的应用204

参考文献206

第十二章 植物电镜细胞化学技术207

第一节 电镜细胞化学技术的基本原理和实践207

第二节 酶的电镜细胞化学技术209

一、酶细胞化学简况209

二、酶定位方法举例210

第三节 多糖的电镜细胞化学技术214

一、钌红染色法215

二、羟胺-氯化铁法215

三、胶体金属法216

四、高碘酸氧化法216

第四节 外源凝集素技术219

一、标记凝集素221

二、固定组织和细胞221

三、凝集素和细胞结合222

四、电镜观察223

参考文献223

第十三章 植物免疫电镜技术225

第一节 免疫定位技术发展简史225

第二节 抗原和抗体227

第三节 免疫电镜实验程序229

一、制备抗原230

二、制备抗血清231

三、分离抗体233

四、标记抗体235

五、制备组织238

六、免疫定位(染色)238

七、定位后处理240

八、解释实验结果240

第四节 免疫电镜技术在植物学研究中的应用241

参考文献242

第十四章 植物电镜放射自显影技术244

第一节 放射自显影技术的基本概念和发展简史244

第二节 电镜放射自显影实验操作程序247

一、引入同位素247

二、制备超薄切片256

三、自显影258

参考文献264

第十五章 扫描电子显微镜265

第一节 扫描电镜的发展和应用265

第二节 扫描电镜的原理和结构267

一、电子束的产生269

二、扫描原理271

三、二次电子信号的产生、检测、放大和显示273

第三节 扫描电镜的性能特点275

一、景深大,图像的立体感强,特别适用于具有复杂空间构型的粗糙表面成像275

二、放大倍数的范围广275

三、样品制备比较容易,而且可观察大块的和厚的样品276

四、在观察时样品可在样品室中被转动和平移,这便于在不同角度和位置观察样品的各个区域276

五、利用的信号种类较多276

参考文献278

第十六章 植物扫描电镜样品制作法280

第一节 制样操作的一般程序280

一、取材280

二、清洁281

三、固定281

四、脱水282

五、干燥282

六、把样品粘到样品台上282

七、喷镀284

第二节 制样的方法286

一、活体观察法286

二、新鲜样品直接观察法287

三、冷冻样品直接观察法287

四、空气干燥法288

五、冷冻干燥法289

六、临界点干燥法290

七、导电染色法294

八、断裂法296

第三节 关于某些样品的制备299

一、大的样品299

二、小的样品300

三、软的样品303

四、硬的样品304

参考文献307

第十七章 植物样品的X-射线显微分析309

第一节 电子探针的特点和应用309

一、测定植物体中天然存在的元素311

二、探查植物体内离子的运输途径311

三、研究植物激素的作用312

四、植物矿质营养研究312

五、细胞化学方面的研究312

第二节 波谱分析法和能谱分析法313

一、波谱仪314

二、能谱仪316

第三节 植物X-射线显微分析样品制作法318

一、常规制作法318

二、沉淀法321

三、空气干燥法323

四、冷冻超薄切片法323

五、冷冻干燥法324

六、冷冻取代法324

七、冷冻含水样品的直接分析法325

参考文献326

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