《表1 荧光定量PCR引物序列》
后反转录成cDNA参照EasyScript?One-Step gDNA Removal and cDNA Synthesis SuperMix(北京全式金生物技术有限公司)说明书的反应体系20μL:RNA 50 ng-5μg,Oligo(dT)1μL,补水至8μL,65℃孵育5 min;冰上冷却2-3min,然后再加入2×ES Reaction Mix 10μL,EasyScript RT Enzyme Mix 1μL,gDNA Remover 1μL,42℃孵育1 h;85℃5 s,将提取的RNA反转录成cDNA,并将产物稀释10倍用于qRCR.根据前期茉莉花转录组数据中筛选出香气相关基因序列,通过PRIMER 3.0网站设计荧光定量引物(表1),以茉莉花Actin为内参基因,参照Transstart?Tip Green qPCR SuperMix(北京全式金生物技术有限公司)说明书的反应体系10.0μL:qPCR Super Mix 5.0μL,cDNA模板1.0μL,上、下游引物各0.2μL,ddH2O补足至10μL,扩增程序:94℃预变性30 s;94℃变性5 s,60℃退火30 s,进行40个循环,每个样品3次重复.荧光定量数据使用Excel采用2-??Ct法进行定量分析,并利用SPSS进行统计分析.
图表编号 | XD00158920300 严禁用于非法目的 |
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绘制时间 | 2020.08.25 |
作者 | 陈笛、陈雪津、郭永春、王鹏杰、陈桂信、叶乃兴 |
绘制单位 | 福建农林大学园艺学院、茶学福建省高校重点实验室、福建农林大学园艺学院、茶学福建省高校重点实验室、福建农林大学园艺学院、茶学福建省高校重点实验室、福建农林大学园艺学院、茶学福建省高校重点实验室、福建农林大学园艺学院、茶学福建省高校重点实验室、福建农林大学园艺学院、茶学福建省高校重点实验室 |
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