《表1 荧光定量PCR引物序列》

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《新西兰兔肌内和皮下前体脂肪细胞原代培养与诱导分化的研究》

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将2种细胞接种到6孔板诱导分化，分别在0、2、4、6 d提取细胞的总RNA，并反转录成c DNA。用Primier 5.0设计PPARγ、LPL、CEBPα、FAS和GAPDH的荧光定量引物（表1），并由生工生物工程股份有限公司合成（中国上海），其中GAPDH持家基因作为内参。反应体系20μL:2×TB Green Premix Ex Taq 10μL终浓度为1×TB Green Premix Ex Taq，上、下游引物各0.4μL，终浓度为0.2μmo L/L，cDNA模板2μL终浓度为5 ng/μL，ddH2O 7.2μL。利用LightCycler?96实时荧光定量PCR系统，检测2种前体脂肪细胞分化过程中相关基因的表达情况；采用2-ΔΔCt的方法计算基因的相对表达量。