《表1 荧光定量PCR引物序列》

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《两种饲养方式对苏尼特羊肉脂肪酸组成和脂肪代谢相关基因表达的影响》

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采用TRizol法提取总RNA，经琼脂糖凝胶法和紫外分光光度计检测被提取总RNA完整性和含量。cDNA由反转录试剂盒法制备，置于-20℃保存、待用。目的基因和管家基因的引物参照美国国立生物技术信息中心中提供的序列进行设计，引物序列如表1所示。引物均由上海生工生物工程有限公司合成。荧光定量PCR程序为预变性:95℃30 s；变性:95℃5 s，退火:57℃30 s，延伸:72℃30 s，共计35个循环；延伸:72℃10 min，4℃保存24?h。试剂配制选用SYBR?Premix?Ex Taq?II试剂盒说明书的CFX96??Real-Time?PCR?Detection?System步骤操作。以FASN、SREBP1-c、DGAT、PPARγ、HSL、LPL、FADS1、FADS2作实验基因，18S?RNA作管家基因，分别做3个平行，两个阴性对照，进行实时荧光定量反应。